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질문 Phospholipid Thin layer Chromatography 자문을 구합니다.
올챙이뱌쿠(대학원생)  | 04.22 12:09

안녕하십니까, Phospholipid를  Thin layer Chromatography 방법으로 보고자 하는데  세팅에 어려움이 있어 자문을 구합니다.

 

develop을 하는데 어려움을 겪고 있는데요,

Iodine gas를 사용해 보았으나 아무것도 나오지 않아 플레이트 전체가 까맣게 될 때까지 지켜보았으나 별다른 결과는 없었고,

primulin을 사용하여 develop하였을 때 standard만 희미한 band가 나왔으나 UV를 위에서 쬐어 사진을 찍을 수 있는 장비가 없고 band가 너무 약하여 육안으로만 확인이 가능했고 일반 카메라로는 잡히지 않았습니다.

sample을 kit의 4회분 양으로 늘려 prep하여 다시 진행해보았지만 별다른 차이가 없었습니다.

 

현재의 문제점은

1. sample prep시 추출량이 너무 적음(datasheet를 보니 kit가 원래 nmol단위로 추출되는 kit인 것 같습니다.)

2. 사진으로 현상 할  수 있는 Develop방식이 필요하다.

인 것으로 생각하고 있습니다.

 

계속 레퍼런스를 확인하고 있지만 생각처럼 레퍼런스대로 잘 지 않는 상황이 반복되어 이 실험을 실제로 해 본 분들은 어떠한 방식을 사용하셨는지 자문을 구하고 싶습니다.

 

1. sample prep방식은 어떤 것을 사용하시는지요?

2. sample loading시 어떻게 정량하여 어느정도 양을 loading하시는지요?

3. develop 방식을 어떤 것을 사용하셨는지요?

 

이 외에 어느 것이라도 조언해주실 것이 있다면 감사히 받겠습니다.

 

바쁜 시간 내어 읽어주셔서 감사합니다.

 

#Phospholipid
 
#Thin layer Chromatography
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  04.22 12:26  

1. sample prep방식은 어떤 것을 사용하시는지요?

: 추출 시료 종류가 어떤 것이며 어떤 방법으로 추출했나요?

3. develop 방식을 어떤 것을 사용하셨는지요?

: iodine, H2SO4, phosphomolydbic acid , Rhodamine를 사용하면

발색이 잘됩니다.

 

올챙이뱌쿠  |  04.22 13:10  

1. sample prep방식은 어떤 것을 사용하시는지요?

:
Cell line에서

https://www.abcam.com/lipid-extraction-kit-chloroform-free-ab211044.html

이 키트를 사용하여 extraction 하였습니다.

3. develop 방식을 어떤 것을 사용하셨는지요?

: iodine을 구매하여 밀폐된 용기 바닥에 idodine을 깔고 plate를 그 위에 올려놓고 밀봉된 상태로 인큐베이션 하였는데 develop이 되지 않았는데 혹시 이 방식에서 잘못된 점이 있는지 확인 해 주 실수 있으실까요?

 

답변에 감사드립니다.

대왕개구리SPEED  |  04.22 14:01  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

발색 방법은 문제가 없고 phospholipid가 거의 없어서 안나온 것 같습니다.

사용한 kit는 fatty acid 계열은 추출이 되는 것 같은데 phospholipid에 대해서는

reference가 안보이네요.

1. cell 양을 늘여서 확인

2. 동일 양의 세포로 표준 방법인 CH3Cl-MeOH 추출 방법에서 phospholipd를

우선 확인 후 잘 나오면 kit 방법은 배제

위 2방법으로 진행해 보는 것이 좋을 듯 합니다.

올챙이뱌쿠  |  05.03 11:36  
넵, 많은 도움이 되었습니다. 감사합니다!
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