thrombin 3개 제품 중에 하나만 투명환이 나타났다구요?
이 설명은 어떻게 실험 했는지 이해가 안되네요.
thrombin은 fibrinogen을 fibrin으로 전환시키는 역할을 하고 분해하는 역할을
하지는 않습니다.
trombin으로 finbrin pate를 제조하면 불투명한 색이 나오면 정상적입니다.
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qhal29
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20.04.21 14:40
speed님 답변 감사드립니다!
제가 질문을 너무 모호하게 드린거 같아 죄송합니다.
3곳에 제조처로 만든 plate는 불투명한 색으로 나왔습니다.(2군데는 agrose의 불투명한정도 반응이 일어난 한곳은 확연하게 불투명해 보임)
제가 말한 투명환은 plate에 nattokinase를 접종하였을때 3개중 1개의 plate에만 투명환이 나왔다는 말이었습니다.(모두 같은 농도 접종)
fibrin plate를 잘못 만들었을 가능성이 높습니다.
agarose를 사용하는 방법은 fibrin plate를 만드는 original 방법에서 변형된
방법인데 어떻게 만들었는지 설명을 해주면 원인을 파악하기 좋을 듯 합니다.
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레벨1
qhal29
(과기인)
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20.04.21 17:24
현재 fibrin plate 만드는 방법
1. 10X(0.1M) PBS(phosphate buffered saline) pH 7.2로 제조
2. PBS로 녹여 0.5% fibrinogen solution 이 되게 하고 37도씨에서 shaking하여 녹인다.
3. 현재 제조되어 있는 20unit thrombin(sodium borate buffer로 녹임)을 사용
4. PBS 를 전자레인지에 돌리고 이액에 agar를 넣어 1%가 되게 녹인다.
5. 1% agar 20ml, 0.5% fibrinogen 5ml, 20unit thrombin 0.5ml 을 섞어 petri dish에 부은후 굳힌다.
6. 혈전용해효소를 점적시킨후 37도씨에 16시간 배양한다.(같은농도)
이후에 확인한결과 3개중 1개의 plate에서만 투명환이 발견되었습니다....
5. 1% agar 20ml, 0.5% fibrinogen 5ml, 20unit thrombin 0.5ml 을 섞어 petri dish에
부은후 굳힌다.
: agar를 충분히 식힌 후 혼합하지 않으면 thrombin이 실활됩니다.
그리고 fibrinogen을 녹일 때는 shaking하면 거품도 많이나고 안좋습니다.
37도 incubator에서 shaking없이 녹이는 것이 좋습니다.
아마도 thrombin이 실활되어 fibrin이 만들어 지지 않아 clear zone이 형성되지
않았을 겁니다.