안녕하세요. 환경공학 석사 2학기 과정 대학원생입니다.

생물 실험 관련하여 여쭤볼게 있어 질문 올립니다.

미세조류내 total protein의 양을 정량하고자 실험을 진행하고 있습니다.

정량 프로토콜은

1. sample의 원심분리를 통한 pellet 생성 (PBS washing 3번)

2. pellet을 RIPA buffer로 resuspension

3. microtube 2ml 넣고 sonication bath에서 10분간 sonication

4. 원심분리 후 상층액을 따서 BCA 정량키트로 단백량 확인.

입니다.

여쭤보고싶은것은

1. 전반적으로 실험과정에서 문제가 있을지. 

2. 4번에서 상층액의 단백질은 soluble단백질이라 하였는데,

그렇다면 total 단백질의 양을 알기 위해서 pellet의 insoluble 단백질양은 어떻게

확인 할 수 있을지 여쭤뵙니다.

(RIPA Buffer에 SDS 1%를 추가로 넣으면 단백질에 음전하를 띄게하여 insoluble도 같이 상층액에 녹는다는 말을 들었는데, 정확한 레퍼런스가 없습니다.)

추가실험으로 western blot 등은 하지 않을 것이고 total protein의 양만 알면될거 같습니다. 

생명공학이 주전공이 아니라서 짧은 지식 양해부탁드립니다.

선배님들의 조언 부탁드립니다. 감사합니다.