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cytotoxicity 문의
레벨1 ELISA하수 (대학원생)
선배님들 안녕하세요. cell 실험 초보자입니다..
현재 myeloma cell (suspension cells)에 CCK-8(dojindo)을 이용하여 cytotoxicity test를 진행중인 학생입니다.
현재 test의 protocol은 아래와 같습니다.
(예비 시험이라 duplicate로 진행하고 있습니다. 본시험에서 triplicate로 진행하고 edge effect도 고려하여 design할 예정입니다.)
1.96-well plate를 seeding 하루전 37도, 5% CO2 조건으로 incubation.
2. 96-well plate에 2x104/well로 seeding후 24hr incubation. (cell doubling time: 50hr)
3. 농도별로 약물처리.
4. 48hr 이후 450nm에서 측정.
실험 결과는 첨부한 사진과 같고, 막히는 부분이 너무 많아 도움을 요청드립니다.
1) well간의 O.D 값이 차이가 나는건 seeding이 고르게 되지 않은건지?(multi pipette을 이용하여 90uL/well로 seeding 합니다.)
2) Blank 값과 O.D값이 차이가 거의 나지 않는건 독성농도에 도달하지 않았다고 봐야하는건지?
3) O.D값이 전체적으로 낮은건 cell이 충분히 자라지 않은 시간에 CCK-8을 진행한건지?
4) 약물 처리 후, 6일 후 흡광도를 찍는 경우도 있다고 봤습니다. 이러한 경우 배지의 교체가 필요하다고 생각되는데, suspension cell의 경우 교체를 안해도 되는건지? 해야된다면 어떤 방법으로 해야되는지.
개인실험을 진행하고 있고, 주위에 도움을 요청드릴 사람이 없어 선배님들에게 도움을 요청드립니다. 바쁜 시간을 뺏게 되어 죄송하고, 후배에게 조언 부탁드립니다.
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