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 전체 > Microbiology > Bacteria
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질문 CLSM 결과 해석 도움 부탁드립니다.
알Eer(대학원생)  | 2020.04.10 20:19
첨부파일 파일첨부: clsm.jpg (1.35 MB)
이미지 첨부파일

안녕하세요. 현재 S.mutans biofilm을 연구하는 대학원생입니다.

바이오필름이 얼마나 사멸되는지를 실험중입니다.

원래 상관없는 분야를 하다가 갑자기 이 분야 실험을 맡게 되어 시행착오가 많습니다ㅠ

live/dead baclight bacterial viability kit를 이용하여 염색하였고 CLSM을 이용하여 사진을 얻었습니다. live는 green이 나타나고 dead는 red가 나타납니다.

제가 궁금한 것은

1. 사진에 보이는 검은 부분들이 염색이 안된 cell인지, 아니면 그저 blank background일까요?

2. 컨트롤과 비교하여 물질 처리 후에 green의 green 형광이 엄청 줄어들었는데 이것도 dead로 볼수 있는지요? 그렇다면 왜 red로 염색되지 않았을까요?ㅠ

3. 배양한 균의 수가 너무 많아서 ((10^8)을 BHI+5% sucrose에 24 h 배양) 조금 줄이면 사진이 괜찮을것같다는 조언을 받았는데요, 시약에 비하여 균이 너무 많아서 red 염색이 되지않은것이라고 생각할 수 있을까요 (선행연구 따라 PI와 Syto 9 3uL씩을 PBS 1mL에 희석하여 사용하였습니다)? 

답변부탁드립니다 감사합니다 ㅠ

#confical
 
#CLSM
 
#공초점레이저주사현미경
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