실험 방법에 문제가 없다면 감소 한계 이하이기 때문에 0으로 봐야 합니다.
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생명러버
(비회원)
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20.04.10 17:12
그렇다면 만약에 흡광도 보정값은 양수이지만 단백질의 양을 계산하였을 때 음수가 값이 마이너스 값이 나와도 0이라고 봐야하나요??
- 그렇다면 만약에 흡광도 보정값은 양수이지만 단백질의 양을 계산하였을 때
음수가 값이 마이너스 값이 나와도 0이라고 봐야하나요??
: 흡광도가 +인데 단백질양을 계산하면 -가 나온다면 STD curve를 한번
확인해 보세요.
흡광도 = 단백질양인데 앞뒤가 안맞는 결과인것 같습니다.
실제 측정한 값을 한번 올려주세요.
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생명러버
(비회원)
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20.04.10 19:11
제가 보낸 것이 맞는지 모르겠습니다ㅜ
실험은 아래와 같이 진행되었습니다.
단백질의 양을 모르는 시료 우유를 0 ,1/5000 ,1/2500, 1/1000, 1/500, 1/100 순서의 비율로 증류수를 이용하여 희석해 줍니다. 이때, 마지막 부피가 10ml이 되도록 희석합니다.
각각의 희석된 우유 시료로부터 200ul씩 Label된 실험관에 분주합니다.
단백질의 양을 모르는 시료 우유를 0 ,1/5000 ,1/2500, 1/1000, 1/500, 1/100 순서의 비율로 증류수를 이용하여 희석해 줍니다. 이때, 마지막 부피가 10ml이 되도록 희석합니다.
각각의 희석된 우유 시료로부터 200ul씩 Label된 실험관에 분주합니다.
희석된 우유에 각각 5ml의 protein reagent를 넣고 거품이 생기지 않도록 시험관을 봉한 뒤, 천천히 뒤집으면서 섞어줍니다.
protein reagent를 넣고 발색이 되도록 약 5분 정도 기다립니다.
5분뒤 반응이 끝난 protein을 cuvette에 옮겨줍니다.
그래서 BSA의 곡선을 만들고, 그 공식의 y의 값에 시료의 보정한 흡광도값을 넣어 위의 게시물처럼 계산하였습니다. 어디서 부터 잘못된 건가요...?ㅠㅠ
Data는 잘 봤습니다.
우선 어떤 단백질 정량 방법을 사용했나요?
1. BSA의 STD curve의 추세선이 r^2=0.987 정도 밖에 안나옵니다.
적어도 0.99xxx정도는 나와야 합니다.
희석이나 피펫팅에 주의해서 다시 측정을 하는 것이 좋을 듯합니다.
2. 희석시료의 경우 1/2500 시료가 0.489가 나왔는데 1/5000 시료가 0.182가
나왔다면 실험에 문제가 있는 겁니다.
희석을 많이 하여 단백질이 거의 없다면 시료 0의 흡광도 0.449에 가까운
숫자가 나와야 합니다.
위의 답변 한개가 사라졌네요.
식이 잘못된것은 설명하기가 힘들며 1/2500의 단백질값은 ml 당 3.138mg이
나옵니다.
2500, 1000, 500배 희석한 시료의 흡광도 또한 들쭉날쭉합니다.
전체적으로 봐서는 희석, 피펫팅 문제로 보이며 다시 측정을 해 보는 것이
좋을 듯합니다.
어떤 단백질 정량 방법을 사용했나요?
시료의 경우 시료 200ul + 시약 5ml로 측정했다고 했는데
BSA의 경우 BSA 용액 얼마를 시약 5ml로 측정했나요?
첨부된 계산식은 잘못된 것입니다.
BSA의 회귀식이 어떻게 나왔나요?
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생명러버
(비회원)
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20.04.11 14:01
Bradford방법을 사용하였고, BSA용액200ul을 시약 5ml로 측정하였습니다.
제가 curve의 농도 단위를 mg/ml로 하여서 BSA의 회귀식은 아래와 같습니다.
혹시 계산 식을 알수있을까요...? ㅠㅠ
식을 어떻게 세우는지 모르겠습니다ㅠㅠㅠ
괜찮으시다면 1/2500의 단백질값이 ml 당 3.138mg이 나온 식을 알려주실수 있을까요,,,?
저는 보정흡광도랑 단백질양 모두 음수로 나왔는