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질문 동결세포주 풀 때,,,
알bunny(대학원생)  |  04.10 11:14

안녕하세요

저희 실험실은 액체 질소통을 구입하기 전까지는 -80℃ deepfreezer에서 얼려서 사용했고, 풀 때 attach 및 growth도 문제없이 잘 됬습니다.

그런데 이번에 액체 질소통을 새로 구입하여 옮긴 이후 부터 세포를 풀면 붙지 않고 다 떠버립니다. 여러 세포주를 여러번 풀어봤지만 붙지 않습니다.

혹시, deepfreezer에서 액체 질소통으로 옮기면 너무 급속 냉각이 되어서 세포가 죽기도 하나요,,? 그런 이야기는 들어본 적이 없지만 다른 환경은 변화 된 것이 없어서,, 고민입니다.

아시는 분들은 조언 부탁드립니다. 

감사합니다.

#세포주
 
#동결세포
 
#액체질소
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리닥눈삼  |  04.10 11:28  

액체질소로 들어가기까지의 동결보존 과정이 어떻게 되나요? 얼릴 땐 천천히 얼려야 합니다.

알bunny  |  04.10 11:38  

저희가 사용하는 deepfreezer가  -63℃ 정도 인데 짧게는 2~3일 길게는 몇달까지 보관 되있었고 액체질소가 들어오기 전에는 풀어주었을 때도 잘자랐습니다.

액체 질소로 옮긴 지는 7일 정도 되었습니다.

지금 deepfreezer에 얼린지 2일 정도된 세포도 붙지 않고 있습니다...

저희의 deepfreezer의 온도에서 액체질소 온도사이의 gap이 너무 큰 것이  문제일까요?

 

개구리아이스티  |  04.10 13:14  

세포 보관할 때 freezing container에 넣고 -80℃에서 하루 보관 후 액체 질소로 옮기는 방법 혹은 cell banker 같은 제품을 썼다면 별도의 컨테이너 없이 deepfreezer에서 쭉 보관하는 방법이 있습니다.

deepfreezer에서 얼린 후 액체 질소로 옮기는 것이 세포에 문제를 끼쳤다고 생각이 되지는 않습니다.

해브어굿타임  |  04.10 17:14   

ice chamber에 넣어서 deep freezer에 하루 놔뒀다가

액체질소에 넣어서 보관합니다.

바로 액체질소 넣으면 세포가 망가진다고 들어서요 ㅎㅎ

예전에도 똑같이 해서 세포가 잘 자랐다면
이번에 무슨 처리를 잘못해서 세포가 다 죽은게 아닐까 생각해봅니다.

DMSO, FBS, 배지 양을 잘못 넣었다던가 해서

개구리닥눈삼  |  04.10 22:04  

동결보존 과정에 큰 문제가 있어보이진 않네요.

세포가 붙지 않고 다 죽어있던가요?

가끔 thawing 하였을 때 부착세포가 부착하지 않고 크는 것을 본 적이 있습니다. 배양액 모아서 다른 flask로 옮겨주니 잘 붙어서 자랐습니다.

알bunny  |  04.16 10:48  

답변해 주셔 감사합니다.

지금 모든 세포를 다 풀었는데

1~2개 vial 만 살아있고 나머지는 부착이 안되고 다 죽었습니다.

말씀해 주신 것 처럼 액체질소로 옮겼다고 해서 죽지 않는다면

deepfreezer에 보관당시 온도의 문제 혹은 기타 문제로 이미 죽었을 것 으로 예

상 합니다.

 

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