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질문 세포에 sample 처리하는 방식에 대해
알살려주세요1234(대학원생)  |  04.09 20:25
안녕하세요. 1년차 석사과정을 하고있는 대학원생입니다..

sample에 대한 약리활성을 in vitro 수준에서 보고 있습니다. 3T3-L1 cell을 키우고 있구요.

sample을 DMSO에 녹여서 0.5 % 처리를 하는데요.
6 well 기준 2 mL 배지를 넣어주는데,
0.5 %니까 10 uL sample을 넣어줍니다.

sample을 cell에 처리할때 어떤 방식으로 하시나요?

1. media에 섞어 처리
2. Cell에 직접 처리

media에 섞어 처리한다는 것은
2 mL media에 sample 10 uL를 넣고 섞은 후에
Cell에 분주하는 것이고

Cell에 직접 처리한다는것은
2 mL media를 먼저 cell에 분주하고
그 cell에 10 uL sample를 바로 넣어주는 것입니다.

하지만 직접처리하게 되면 처리된 부분의 바로 아래 cell들이 다 죽어버립니다.
아무리 천천히 넣어줘도 cell이 뜨거나 죽는걸 방지하긴 어려웠습니다.
DMSO가 처리되면서 well 바닥에 가라앉는게 보이는데
Well 안에서 파이펫팅은 할 수 없을뿐더러,
8자로 plate를 흔들어 섞어도 배지에 섞어처리하는 것보단 균일하게 섞이는거 같지도 않습니다.

그러나, 교수님께서 cell에 직접처리하는 것을 더 원하시는터라..

그래서 보통은 어떻게 처리하는게 일반적인지 여쭙고싶습니다..
#sample treatment
 
#세포처리
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  04.09 22:14  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

media에 혼합해서 처리하는 것이 가장 좋은데 직접 처리를 한다면 DMSO에

시료를 고농도로 제조한 후 media로 1차 희석 후 적정 농도의 DMSO농도로

만든 후 cell에 처리하는 것이 좋습니다.

알살려주세요1234  |  04.09 23:31  
감사합니다 SPEED님! 많은 도움이 되었습니다. media에 희석하여 처리하는 것이 좋군요! 실험에 참고하겠습니다:)
해브어굿타임  |  04.10 17:20   

0.5%로 희석한다고 하는 것은

200배 희석한다는 뜻으로 바꿔말해도 되는데..

 

sample 10uL, media 1990ul를 넣어야 되는 거 아닌가요??

이 둘 15ml tube에 분주량 +1 정도 해서 만들어 놓고

잘 섞어준 뒤 2mL씩 피펫팅해주면서 분주하면 됩니다

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