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 전체 > Cell Biology > Transfection
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질문 293cell에 대해서 질문이 있습니다.
알무루(대학원생)  |  04.09 13:00

293cell 로 tranfection실험을 하고 있습니다.

PEI로 DNA를 tranfection하거나 LTX&PLUS로 siRNA를 tranfeciton하는데 cell이 예전보다 많이 뜹니다.

Tranfeciton optimized medium (TOM) media를 사용하는데 DMEM과 media change를 할 때 많이 떠버립니다.벽면을 따라서 살살 넣어주고 있는데 예전보다 더 살살 넣는거같은데  6well에 3분의1정도가 뜨는거같습니다.

cell이 계대배양을 많이 해서 안좋아져서 그런건지 예전에 만들어둔 stock을 풀고 있는데 현미경으로 봤을 때 cell의 상태가 안좋아 보이다 하루 지나면 오염이 되어 있더라구요. stock은 지금 4개정도 푼거같습니다...

stock은 액체질소에서 꺼내서 37도 water bath에 뒀다가 녹으면 5분 spindown시켜 10%FBS DMEM에 풉니다.

제가 하는 tranfection과정에서 의심되는 문제점이나 stock을 풀 때의 문제점이 있을까요ㅠㅠ

#HEK293
 
#transfection
 
#stock
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
앞다리CHINyo76_philekorea  |  04.09 17:38  

현재 풀어쓰신 cell stock 말고 그 전 stock이 있으면 체크해보세요.

계속해서 오염이 된다면 media를 비롯하여 관련 solution을 모두 새것으로 바꿔 사용하여 확인하시길 바랍니다.

저도 예전에 293 cell을 사용하다 오염이 나타난 적이 있습니다.

그때 PBS 오염이 의심되어 새로 만들어 사용했던 적도 있고, stock이 오염되어 문제 된 적도 있습니다. 운좋게 겨우 살리기는 했으나 가능하시면 오염되지 않은 것으로 진행하시는 것이 정신 건강에 좋을 듯 싶습니다.

올챙이화랑사다함  |  04.09 20:17  

윗분 말씀에 추가적으로..

 

293은 transfection 후에 엄청 잘 떨어지긴 한데,

혹시 cell density를 조금 낮춰서 해보시는건 어떨까요?

cell들이 너무 붙어있어도 연쇄적으로 떨어지는 것도 많아서요.

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