먼저 Tris-HCl 넣은 양이 많이 들어간거 같아요

0.25 M / 1 M * 50 ml = 12.5 ml로 계산 되어서요ㅎㅎ 아마 많이 들어가서 산성이 된거 같아요 아마 줄이면 다시 파란색이 될 듯해요!

추가로 일반적으로 pH를 맞춘다고 해서 western에 크게 영향이 있지는 않을듯해요 실험실마다 조성이 조금씩 다른걸 반영하면 일부 성분이 적게 들어간다고 해서 실험에 크게 영향을 주지는 않을듯합니다. 그래도 실험실마다 맞춘 조건이 있으니 실험이 크게 이상하게 되지 않는한 그 조건을 유지하는걸 추천드려요

[마지막으로 제가 대학원생때 썼던 조성인데 참고만 하세요^^]

5X Protein Sample Buffer
0.16 M Tris-HCl (pH 6.8)
25%  Glycerol
12.5%  SDS
0.05%  BPB
8X  2-Mercapto Ethanol