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질문 western blot 실험중, 4x sample buffer 조성에관하여 질문드립니다
알홍스원(대학생)  | 2020.04.08 22:36

western blot 에 쓸 4X sample Buffer 에 bromophenol blue 를 넣었는데 색이 노란색이 나왔습니다 ㅠ 검색해보니 bromophenol blue 가 노란색이면 pH가 산성이라는 말인데, 이때 NaOH를 넣어서 파란색이 되도록 조절해도 western blot 을 진행하는데는 문제 없을까요? 조성은 아래와 같습니다ㅠㅠ

  Final concentration 넣은 양
1M Tris-HCl pH6.8 0.25M 25ml
Glycerol 40% 20ml
SDS 8% 4g
2-Mercapto Ethanol 4% 2ml
Bromophenol Blue    

total volume 은 50 ml 로 하였습니다

#western blot
 
#웨스턴블랏
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
뒷다리영빙구  |  2020.04.09   

먼저 Tris-HCl 넣은 양이 많이 들어간거 같아요

0.25 M / 1 M * 50 ml = 12.5 ml로 계산 되어서요ㅎㅎ 아마 많이 들어가서 산성이 된거 같아요 아마 줄이면 다시 파란색이 될 듯해요!

추가로 일반적으로 pH를 맞춘다고 해서 western에 크게 영향이 있지는 않을듯해요 실험실마다 조성이 조금씩 다른걸 반영하면 일부 성분이 적게 들어간다고 해서 실험에 크게 영향을 주지는 않을듯합니다. 그래도 실험실마다 맞춘 조건이 있으니 실험이 크게 이상하게 되지 않는한 그 조건을 유지하는걸 추천드려요

[마지막으로 제가 대학원생때 썼던 조성인데 참고만 하세요^^]

5X Protein Sample Buffer
0.16 M Tris-HCl (pH 6.8)
25%  Glycerol
12.5%  SDS
0.05%  BPB
8X  2-Mercapto Ethanol

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