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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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질문 Protein extraction 관련하여 질문드립니다
알orangee(대학생)  |  04.08 17:59

Raw 264.7 cell의 protein extraction을 진행하였는데,

Western blot을 통해 분석결과,

p-form의 LPS 무처리군의 p-ERK 발현이 억제되어야 하는데, 억제되지 않았고 오히려 LPS 유도군보다 높은signal이 나왔습니다. ERK signal은 일정하였습니다.

 

protein extraction은 4℃ PBS wash 후 cell scrap하여 수거한 후 RIPA buffer (1X protease and phosphatase inhibitor cocktail)로 lysis 하였습니다. Bradford standard curve를 이용하여 정량 후 western blot에 사용하였습니다.

 

 

확인해본 결과 cell상태에는 이상이 없었고, western blot의 과정보다는 단백질 추출 과정에서 문제가 있었던 것 같은데,

RBL-2H3 세포에서도 같은 문제가 발생되어 도움을 구합니다ㅠㅠ

 

 

 

 

#protein
 
#western blot
 
#protein extraction
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