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 전체 > Molecular Biology-RNA > mRNA Analysis
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질문 RNA추출 과정중 heatingblock 55도 가열 이유
올챙이토짜(대학원생)  | 04.08 13:29

안녕하십니까 초보대학원생입니다.

 

여러가지RNA 추출 프로토콜비교중 

 

75%ETOH washing까지 맞춘 뒤에 건조 후 DEPC나 RNase free water 첨가 후 heating block 55도 가열 하는 곳도 있고 안하는 프로토콜이 있어서 여쭤봅니다.

 

heating blcok을 하는 이유좀 알수있을까요?

#RNA
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  04.08 14:00  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

spin column의 경우 elution 효율을 높이려고 하는 것입니다.

37도 정도 heating해도 충분합니다.

manual로 prep.했을 경우 마지막 단계에서 heating하는 것은 별로 의미가

없습니다.

heating 후 cooling하면 즉시 가닥 내 결합이 다시 형성됩니다.

개구리seraphina  |  04.08 14:45  

+ RNA의 dimer, hairpin구조 등 2차구조를 풀어주기 위함입니다.

 

꽃개구리느림보  |  04.09 10:48  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

"여러가지 추출방법 중"이라고 하셨으니, 대충 짐작컨대 crude total RNA를 알콜 침전시킨 후에 용해도를 높이기 위한 목적인 듯 합니다. 식물이나 균류의 total RNA를 추출하는 CTAB 방법이 대표적입니다. CTAB 버퍼로 추출하고서 DEPC water나 SDS를 저농도로 첨가한 SSTE 버퍼로 50-60도로 녹이기도 하는데요, 시료에 고분자량의 불순물이 많이 들어있으면 RNA가 그 복합 침전에서 잘 녹아나오지 않아서 그렇습니다. 그런데 개인적인 경험상, 실온의 DW대신 50도를 처리했을 때 최종적인 수율에 이득이 적었습니다. 오히려 품질(260/230)이 더 나빠지는 경우가 있습니다. 결국은 시료와 추출방법에 따라 효과를 시험한 후에 가부를 결정하는 것이 좋을 겁니다. 

 

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