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질문 protein loading 관련
알xijvnaamk(대학생)  |  04.06 18:02
첨부파일 파일첨부: cccc.PNG (124 KB)
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안녕하세요 제가 SDS-PAGE를 위한 실험에서 gel을 잘만들고 있는지를 알아보기 위해서 protein을 loading후 silver staining을 하여 protein이 잘 분리되었는지를 확인을 하였습니다.

결과를 보니 marker는 분리가 되었지만 sample의 70 size이상이 잘 안보이더라구요, 이것이 sample들이 변성이 일어나서 문제가 된 것인지 gel의 문제인지 판단이 어려운거 같아 이렇게 도움을 청합니다.

cell line은 293A의 whole protein을 보았으며, 혹시나 해서 0.5ug BSA도 같이 걸어 보았습니다.

#SDS-PAGE
 
#silver staining
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  04.06 18:54  

sliver staining이 균일하게 되지 않아서 문제가 있습니다.

sample 또는 고분자가 없는것 같습니다.

lysis 방법을 한번 점검해 보세요.

BSA 가 전혀 나오지 않았고 0.5ug 정도면 상당히 진한 band가 나옵니다.

그리고 10ug/lane 정도 loading 해서 CBB 염색으로 확인도 해보세요.

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