실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
lysis buffer 조성이 western blot 밴드 위치에 차이를 줄 수 있을까요?
레벨5 클레엉 (대학원생)
제가 보고자 하는 한 단백질이 abcam 등 항체 업체들의 데이터시트에서는 20~25kda 사이에 나오고 있습니다.(약 22kda) 그런데 제가 western blotting을 하면 꼭 25kda이나 그보다 약간 위에 나오고 있습니다. 제가 사용하는 gel 은 12% 아크릴아마이드 겔입니다.
이런 차이가 혹시 lysis buffer 떄문에 오는걸까 싶어서 저희 연구실에서 사용하는 lysis buffer 조성을 올려봅니다.
포스포폼을 볼 때는
50mM Tris(Ph 7.4)
150mM NaCl
1mM EDTA
0.25% deoycholate
1% triton X-100
phosphatase inhibitor(sigma)
protease inhibitor(roche)
위와 같은 조성을 사용하고 있고
일반적인 조성 및 조직은
50mM Tris(Ph 7.4)
150mM NaCl
1mM EDTA
2mM Na3VO4
1mM NaF
0.25% deoycholate
1% triton X-100
phosphatase inhibitor(sigma)
protease inhibitor(roche)
를 사용하고 있습니다.
제가 본 밴드 쉬프팅 현상은 포스포폼을 보는 lysis buffer를 사용했을 때 나타난 현상이었는데요, 저정도의 밴드 쉬프팅은 있을 수 있는 것인지, 만일 그렇지 않다면 제 라이시스 버퍼에서 뭘 고쳐야할지 알려주시면 감사하겠습니다.
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