실험 Q&A Cell Biology > Cell Cycle
[Flow cytometry] Cell cycle 분석 (PI staining) 사용 후 gating 관련하여 도움이 필요합니다.
레벨1 lusion (대학원생)
유세포 분석을 처음해보는 초보라 부족함이 많습니다 ㅠㅠ
종양세포에 약물 처리 후 효과를 확인하는 과정 중 G2/M arrest를 관찰하였는데요~ gating 중에 이상한 부분이 관찰되어서 어떻게 해석해야할지 어려움이 있어 글을 올리게 되었습니다.
약물은 0.2uM-50uM 까지 사용하였고, IC 50는 1uM 정도였습니다.
게이팅은 아래와 같이 진행하였구요[1번 사진]
이를 통해 아래와 같은 cell cycle 데이터를 얻었습니다.
1. 게이팅 하는 방법 중에 PI를 log상태로 보길래 해서 보았는데 아래와 같이 농도가 올라감에 따라 control에 비해 G2/M쪽으로 생각되는 부분에 2가지로 변하는 모양이 보이는데, 고농도 약물을 사용하여 세포에 변화가 발생하여 보이는 것으로 보아도 되는 걸까요? 아래 2번째 사진의 다른 세포주에서도 같은 결과가 나와서 고농도에서 저렇게 변하는것 습니다.
2. Sub-G1 데이터까지 같이 얻어서 apoptosis를 같이 표현하고 싶은데,
2-1) 게이팅 표현 방법은 괜찮은지요?
2-2) 배지를 모두 함께 모아서 뜬 세포도 함께 보는게 맞는건지
2-3) trypsin으로 떼어서 harvest해서 보는데, sub-G1을 표현하는데 문제가 되지는 않으려는지요?
주변에 세포 실험하시는 분들이 없어 간단한 조언이라도 큰 도움이 될 것 같습니다. ㅠㅠ
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