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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 plasmid PCR
올챙이과지주(대학원생)  |  04.01 14:56

plasmid 에서 원하는 gene 영역만 PCR을 이용해서 증폭한 후

(primer는 RE서열을 추가하여 짰습니다.)

recipient plasmid에 삽입을 해주려고 하는데

 

첫 PCR에서 template DNA로 사용할 plasmid를 

bacterial transformation한 후 mini prep을 하여 PCR을

진행해야하나요? 아니면 transformation 하기 전 

plasmid 날것(?)의 상태를 바로 sample로 사용하여

PCR이 가능한가요??

 

관련 내용을 잘 못찾겠어서 여기에 글 올립니다ㅠㅠ

답변 주실 때 관련 내용이 적힌 링크도 같이 해주시면 감사하겠습니다ㅠㅠ

-새내기대학원생-

#plasmid
 
#pcr
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알junsokun  |  04.01 15:28  

날 것(?)이 어떤 상태인지 모르겠네요

 

plasmid가 e.coli에 들어있는 상태라면 colony PCR로 바로 PCR하면 되지만 불특정 밴드가 나타날 가능성이 있습니다

시간도 있고 안전하게 하려면 (샘플 확보를 위해서라도) 한 번 transformation , miniprep 한 후에 PCR을 하시는 게 좋을 것 같습니다

 

plasmid가 추출이 끝나서 초준수 등에 용해되어 있는 상태라면 농도 측정 후 PCR하시면 될 것 같습니다 (이 때도 안전하게 하려면 transformation, miniprep 후에)

 

링크는 PCR 권장 농도 관련입니다

 

https://www.embl.de/pepcore/pepcore_services/cloning/pcr_strategy/optimising_pcr/

알allal  |  04.03 18:15  

날것이 이미 miniprep을 과거에 해뒀던 plasmid를 말씀하시는것 같은데, 양과 농도가 충분하다면, back transformation 할 필요 없이 바로 PCR하셔도 좋습니다. 

윗분이 답변 달아주신것 처럼, 날것의 상태가 E-coli stock이나 plate 처럼 E.coli 안에 plasmid가 들어있는거면, miniprep을 하여서 진행하는것이 좋습니다. 

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