[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
랩박스 - 형광 이미징의 모든 것
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
조회 294  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 제한효소 처리 후 밴드 3개 질문드립니다!
올챙이해징(대학원생)  |  03.31 18:22
첨부파일 파일첨부: DDD.jpg (61 KB)
이미지 첨부파일

안녕하세요. 클로닝 처음 해보는 석사생입니다.

실험실에 선배가 없어 브릭 도움을 많이 받아서 클로닝을 진행중입니다!

저는 발현벡터 pET23d(3.66kb)에 insert(4.65kb)를 넣어서 확인하는 과정에 있습니다.

forward에는 Not1, Reverse에는 EcoR1을 넣어서 프라이머를 짰고

먼저 EcoR1 처리를 해서 밴드를 확인한 후 사이즈에 맞는 밴드를 확인했습니다.

그 후 gel extraction 후 Not1 처리후 밴드를 확인했습니다.

겔 상에서 2,3 번 레인은 사이즈에 맞게 잘린 거 같다는 생각이 들었는데 4번 레인은 밴드가 3개로 보여서 왜 그런건지 도대체 모르겠어서 질문 드립니다.

Q1. 2,3번 레인은 사이즈에 맞게 잘린게 맞을까요? 저 중 하나로 sequencing 진행해도 괜찮겠죠??

Q2. 4번 레인에서 밴드가 3개인 이유가 다 안 잘려서 3개 일까요?

너무 단순한 질문이라면 죄송합니다 ㅠ 처음해보는 거라서 친절하게 답변해주시면 감사하겠습니다!! 감사합니다~

#DNA
 
#클로닝
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알allal  |  03.31 18:32  

마커랑 비교해서 보았을때 4번 레인 밴드 3개 중에 제일 아래가 pET23d 고, 가운데가 인서트 같아요

2,3,4 레인에 보이는 맨 윗밴드가 5.몇 인듯 보이는데, 그게 무엇인지 찾아보는게 좋을것 같습니다. 

cloning 다 하시구 seq으로 확인 하는 단계이시면, 4번 레인을 가지고 시퀀싱 해보면 좋을것 같아요!

대왕개구리SPEED  |  03.31 18:42  

2, 3, 4번 모두 맞는 DNA고 4번 중간 band는 안잘린 band입니다.

또한 확인하기 위해서 전기영동 할 때는 확실하게 확인 가능하도록

DNA양을 충분히 loading해야 합니다.

2배 정도 양을 올려서 실험하면 좋을 듯 합니다.

염기서열 분석 비용이 저렴하기 때문에 PCR product의 경우 base error도 예상

해야 하기 때문에 3개 정도 염기서열 분석을 해보세요.

그리고 4kb이상의 insert이기 때문에 양방향으로 모두 읽을수 없고

primer-walking sequencing을 하면 됩니다.

답변하기
할인행사 광고 검색광고
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
nanoString Panel Discount Promotion (~6월15일까지)!!! (6.16까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN] Spark cyto 하나의 장비로 한 번에!! Multi-mode microplate rea.. (6.20까지)
케이비티 케이비티
[KBT] Rotator, Thermo Mixer, Ultrasonicator, Stirrer 등 기본 실험.. (6.30까지)
셀레믹스 셀레믹스
BTSeq Contiguous Sequencing 서비스 런칭 이벤트 - 무료 분석서비스(1만 마일리지) 제.. (6.30까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
[에펜도르프코리아] Eppendorf 2020 상반기 프로모션 안내 : 실험실 필수품 피펫,원심분리기,PCR.. (8.8까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
4/6  좌우
370,000333,000
92,30087,700
47,20044,900
93,20088,600
339,400322,500
49,00041,700
136,000129,200
139,000132,100
482,000433,800
109,00098,100
482,000433,800
23,00019,600
52,60050,000
924,000
6,0005,100
125,500119,300
66,50063,200
739,000702,100
870,000
773,000734,400
468,000421,200
79,50075,600
17,00014,500
493,000443,700
최근등록   더보기 >
Acute TLR7/8 Agonist - R848(Resiquimod) 실험 시약 농도   06.02
Data sheet에 적혀있는 농도가 정확이 어떤건가요?   06.02
세균기작의 저하 방안에 대하여 질문올립니다!!   06.01
Bradford Assay 방정식 질문   06.01
고등학생 반코마이신(vancomycin) 구합니다!!(삽니다)   06.01
Invertase와 exo-inulinase는 동일 효소인가요   06.01
BCA assay 질문 드립니다.   06.01
오토클레이브나 진탕배양기 대체품   06.01
competent cell 자체에는 플라스미드가 없나요   06.01
MTT asaay standard 관련 질문   06.01
라이카코리아
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크