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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
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질문 Q column의 수명(?)이 있나요?
개구리클레엉(대학원생)  | 03.31 18:12

안녕하세요. 단백질 정제를 주기적으로 하고 있는 학생인데요, 최근에 단백질의 정제도가 약간 떨어진 것을 경험했습니다. 그래서 궁금한게 있는데요..

 

1. 저는 q column을 FPLC할 때 사용하는데, 칼럼을 2019년 12월 경에 사용해서 그 사이에 약 20L 정도의 E coli를 purify 한 것 같은데요, 이 정도면 칼럼의 수명이 떨어졌을까요? FPLC 는 회당 약 6회 정도 실시하고있습니다.

2. 그리고 한가지 더 궁금한게, NaCl gradient 를 이용해서 FPLC 를 하고 있는데요, Elution buffer의 NaCl 농도의 제한이 있나요? 제가 1M NaCl을 사용하다가 2M NaCl을 이용해서 잡단백질을 떨어뜨려주고 있는데요, 이게 혹시 너무 과도하거나 높은가 싶어서 여쭤봅니다. 

#protein
 
#purification
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  03.31 18:49  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

Q 컬럼(Q-sephadex, mono-Q)은 강음이온 컬럼이며 모든 이온교환 레진은 사용

방법, 횟수에 따라 functional group이 조금씩 떨어져 나갑니다.

그러나 2019년 구입 후 아무리 많이 사용해도 아직 사용가능하고 관리만

잘하면 10년 정도는 사용가능합니다.

이온교환 컬럼의 elution은 주로 NaCl을 이용하고 KCl 또는 pH, buffer 농도 또한

이용합니다.

사용후 재생 시 첫단계로 NaCl을 사용하는데 보통 정제에는 1M NaCl까지

사용하고 재생할 때 2M 정도의 NaCl을 사용해도 아무런 문제가 없습니다.

개구리클레엉  |  04.01 10:39  

제가 사용하는 칼럼은 Hitrap Q 칼럼인데, 이 것도 동일하겠죠?

선생님 말씀대로면 IMAC 등의 앞 과정에서 무언가가 문제가 있는거겠군요ㅎㅎㅎ 

참고하겠습니다. 감사합니다!! 

대왕개구리SPEED  |  04.01 10:44  

Q 컬럼을 포함한 모든 IEX 컬럼은 동일합니다.

동일 양, purity의 단백질을 가지고 동일한 방법으로 평형화한 컬럼을 사용하여

결과 추적을 한번 해보세요. 

 

개구리클레엉  |  04.01 10:56  

예 확인해보겠습니다. 감사합니다^^

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