[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
랩박스 - 형광 이미징의 모든 것
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
조회 359  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Q column의 수명(?)이 있나요?
개구리클레엉(대학원생)  |  03.31 18:12

안녕하세요. 단백질 정제를 주기적으로 하고 있는 학생인데요, 최근에 단백질의 정제도가 약간 떨어진 것을 경험했습니다. 그래서 궁금한게 있는데요..

 

1. 저는 q column을 FPLC할 때 사용하는데, 칼럼을 2019년 12월 경에 사용해서 그 사이에 약 20L 정도의 E coli를 purify 한 것 같은데요, 이 정도면 칼럼의 수명이 떨어졌을까요? FPLC 는 회당 약 6회 정도 실시하고있습니다.

2. 그리고 한가지 더 궁금한게, NaCl gradient 를 이용해서 FPLC 를 하고 있는데요, Elution buffer의 NaCl 농도의 제한이 있나요? 제가 1M NaCl을 사용하다가 2M NaCl을 이용해서 잡단백질을 떨어뜨려주고 있는데요, 이게 혹시 너무 과도하거나 높은가 싶어서 여쭤봅니다. 

#protein
 
#purification
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  03.31 18:49  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

Q 컬럼(Q-sephadex, mono-Q)은 강음이온 컬럼이며 모든 이온교환 레진은 사용

방법, 횟수에 따라 functional group이 조금씩 떨어져 나갑니다.

그러나 2019년 구입 후 아무리 많이 사용해도 아직 사용가능하고 관리만

잘하면 10년 정도는 사용가능합니다.

이온교환 컬럼의 elution은 주로 NaCl을 이용하고 KCl 또는 pH, buffer 농도 또한

이용합니다.

사용후 재생 시 첫단계로 NaCl을 사용하는데 보통 정제에는 1M NaCl까지

사용하고 재생할 때 2M 정도의 NaCl을 사용해도 아무런 문제가 없습니다.

개구리클레엉  |  04.01 10:39  

제가 사용하는 칼럼은 Hitrap Q 칼럼인데, 이 것도 동일하겠죠?

선생님 말씀대로면 IMAC 등의 앞 과정에서 무언가가 문제가 있는거겠군요ㅎㅎㅎ 

참고하겠습니다. 감사합니다!! 

대왕개구리SPEED  |  04.01 10:44  

Q 컬럼을 포함한 모든 IEX 컬럼은 동일합니다.

동일 양, purity의 단백질을 가지고 동일한 방법으로 평형화한 컬럼을 사용하여

결과 추적을 한번 해보세요. 

 

개구리클레엉  |  04.01 10:56  

예 확인해보겠습니다. 감사합니다^^

답변하기
할인행사 광고 검색광고
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN] Spark cyto 하나의 장비로 한 번에!! Multi-mode microplate rea.. (6.20까지)
케이비티 케이비티
[KBT] Rotator, Thermo Mixer, Ultrasonicator, Stirrer 등 기본 실험.. (6.30까지)
셀레믹스 셀레믹스
BTSeq Contiguous Sequencing 서비스 런칭 이벤트 - 무료 분석서비스(1만 마일리지) 제.. (6.30까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
[에펜도르프코리아] Eppendorf 2020 상반기 프로모션 안내 : 실험실 필수품 피펫,원심분리기,PCR.. (8.8까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
5/6  좌우
92,30087,700
339,400322,500
101,10060,700
924,000
52,60050,000
262,500157,500
482,000433,800
79,50075,600
482,000433,800
49,00041,700
23,00019,600
242,400145,500
870,000
787,400472,500
109,00098,100
6,0005,100
468,000421,200
370,000333,000
493,000443,700
125,500119,300
739,000702,100
17,00014,500
131,90079,200
50,00030,000
최근등록   더보기 >
X-gal과 빛   05.30
plasmid region   05.30
QIAGEN plasmid midiprep   05.30
M mM uM   05.30
Transformation 결과로 Blue/White selection을 했는데 결과에 대...   05.30
혹시 2 3-dimethylmaleic anhydride사용할때 후드에서 해야되나요?   05.29
overlap pcr primer 질문드립니다.   05.29
구리 이온 향균 효과에 대해   05.29
Cutibacterium acnes 살균법요...   05.29
여러분들은 fibroblast cell line 어떤거 사용하시나요?   05.29
라이카코리아
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아