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질문 bone marrow cell
앞다리동물사랑 *^^*(과기인)  |  03.30 16:49
bone marrow cell 프랩할 때 셀이 너무 적게 나와요...

어떻게 해야 할지....

고수님들 도와주세요 ㅜㅜ
#bone marrow cell
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
...  |  03.30 17:05   

제가 했던 방법과 구글링 하시면 나오는 protocol들 내용 기준으로 말씀 드리면,

개인적으로 제일 중요한 과정은 뼈 내에 골수세포를 얼마나 깨끗하게 씻느냐에 있는 것 같습니다.

배지로 뼈가 투명해질정도로 여러번 씻으면 저는 약 5*10^7 cell 정도는 개체간 차이없이 나왔던것 같습니다~ 

핸들링이 익숙해지셔야 겠지만, 처음에는 배지양을 많이 사용해서라도 깨끗하게 씻긴 정도가 어느정도인지 감을 잡으시면 그 이후에 점점 사용하는 양을 줄여가면서 동일한 결과를 얻으실수 있을꺼예요!

 

적게 나온다는 기준이 어느정도 되는건가요?

경험상 tibia는 하나정도 부러져도 전체 cell 수가 이후 실험이 어려울만큼 타격입지는 않았습니다.

앞다리동물사랑 *^^*  |  03.30 17:49  
실험 못 할 정도로 적어서 연습 중 인데 너무 적게 나와요...ㅜㅜ 그래서 좌절인데요. 내일은 메디아 양 늘려서라도 많이 씻어야 할 것 같습니다.고맙습니다^^
...  |  04.01 13:20   

저는 씻는 배지는 아끼지 않고 썼어요ㅎㅎ 개체당 약 15ml 정도는 여유있게 생각해서 준비했던것 같아요. 

나중에는 배지가 아까워서 PBS(2% FBS) 배지로 washing 했는데, 회수율에 크게 영향 주진 않았어요ㅎㅎ 배지 사용이 부담스러우시면 참고하시면 좋을것 같아요 

 

뼈 양 끝을 cutting 하실때 어느정도로 하는 게 좋을지도 잘 유의해서 하시면 좋을것 같아요 ㅎㅎ 너무 바짝 자르면 needle이 안들어가고 너무 많이 자르면 cell이 소실되니까요

저는 needle 들어갈 정도로 최대한 바짝 잘라서 했어요.

 

두번째로는 개인적으로 aspiration를 주의해서 하시면 좋을것 같아요! 모든 세포실험이 그러하긴 하겠지만 ㅎㅎ cell pellet이 단단하지 않은 상태에서 배지를 너무 많이 제거하면 세포가 많이 소실 되겠죠ㅎㅎㅎ

저는 처음 BMC을 얻고 centrifuge할 때는 pellet이 단단하지 않아서 좀 보수적으로, counting 직전 단계에서는 최대한 제거하는 식으로 진행했었어요~

 

좋은 결과 있으셨으면 좋겠네요 화이팅 하세요~!

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