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 전체 > Microbiology > Bacteria
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질문 bacteriophage contamination 의심되는데 확인 방법이 있을까요
알신삼(대학생)  |  03.30 15:14

안녕하세요!

 

E.coli comp. cell을 TF하여 colony가 잘 뜨는 것을 확인 후 LB에 seeding 하였을 때 안 자라는 문제가 있습니다.. (Amp, Kan 둘 다 해당입니다.)

 

Selection marker의 문제인지를 보기 위해서 plate도 확인(TF 안 한 cell을 streaking하여 안자라는 것을 확인)해봤고 LB도 새로 만들어 써 봤는데요. 아무래도 LB에 seeding만 하면 잘 안자랍니다.

그런데 single colony를 여러 개 각각 접종해보면 몇 개는 자라고 몇 개는 안자라기도 하는데요, 그래서  phage contamination일 수 있겠다 생각해봤습니다.

 

혹시 사용중인 도구나 material 등(pippette, incubator 등)이 phage contam. 되어있는지 확인할 수 있는 방법이 있을까요? 

 

#E.coli
 
#bacteriophage
 
#contamination
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  03.30 17:59  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

그런데 single colony를 여러 개 각각 접종해보면 몇 개는 자라고 몇 개는 안자라기도 하는데요, 그래서  phage contamination일 수 있겠다 생각해봤습니다.

 

=> 액체배지에서 안자랐다는 거지요?

single colony를 여러개 plate에 접종해 보세요.

가능하면 LB나 멸균된 DW 200ul 정도에 colony들을 풀어서 spreading 해 보세요. lawn으로 자라게요.

만일 phage라면 안자라는 zone이 동그랗게 생길 수 있습니다.

 

만일 phage라는 강력한 의심이 들면 확인하지 말고 실험에 사용했던 세균, 배지, 용액 등을 다 버리시길 강.력.하.게. 권합니다. pipet 등은 락스로 닦고, 알콜로 씻고 사용하시고 그 밖의 것들은 autoclave나 baking을 하세요.

왜냐하면 phage는 지독한 넘이라 한 번 실험실에 오염되면 매우 곤란합니다. 완전히 박멸했다 싶다가도 어느 순간 다시 나타나는 무좀같은 넘입니다.

예전에 어느 human genome project를 하던 lab에 T-even phage가 오염되서 그동안 만들었던 human BAC library를 몽땅 폐기했다는 말을 들은 적이 있습니다.

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