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질문 transformation이 안돼요..
알갈릭중독(대학생)  |  03.28 17:29

transformation 시 colony 가 하나도 뜨지 않아요..

실험은

1. rosetta2 50ul + vector 1ul (vector농도 100-150ng/ul ) 1번 resuspend

2. water bath에 42도 45초 heat shock

3. ice 2min

4. Amp 없는 LB broth 를 900ul 넣음

5. 37도 1hr shaking incubation

6. Centri (9k 1min) 돌리고 상층액 400ul 제거후 resuspending

6. 나머지 400ul 배지(+Amp)에 넣고 spreading

이렇게 진행했습니다. 

같은 조건으로 다른분이 실험을 진행했을 땐 colony가 잘 떴는데 같은 vector에 같은 배지, 같은 조건인데 제가 하니까 colony가 하나도 안뜨네요.. 실험과정은 정확하게 진행했다 생각했는데 뭐가 문제일까요.?

Centri 했을 때 pellet을 관찰했으니까 균이 자란거 같기는 한데, 처음에 resuspending 이나 , spreading 시 도말봉을 충분히 식히지 않아서 일까요..?

답답하네요 ㅠ

 

#transformation
 
#cloning
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  03.28 18:07  

방법은 크게 문제가 없는 것 같습니다.

1회용 spreader가 아닌 유리 spreader를 사용하면 충분히 식혀서 spreading하는

것이 좋습니다.

그리고 CP cell 또한 구매해서 사용하면 별 문제가 없지만 직접 제조해서

사용하면 TF 효율에 문제가 생겼을 가능성도 있습니다. 

- 나머지 400ul 배지(+Amp)에 넣고 spreading

: 1 plate에 얼마나 spreading한건가요?

알갈릭중독  |  03.30 15:21  
400ul 했습니다! LB 900ul넣은 것중 centri 돌린후 상층액 500ul 덜어내고 resuspension 한후 400ul 모두 spreading 했어요
대왕개구리SPEED  |  03.30 16:00  

1 plate에 400ul가 spreading되던가요?

원심분리 후 100ul 미만을 남기고 cell을 잘 suspension 후 spreading 해보세요.

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