실험 Q&A Microbiology > Bacteria
transformation이 안돼요..
레벨1 갈릭중독 (대학생)
transformation 시 colony 가 하나도 뜨지 않아요..
실험은
1. rosetta2 50ul + vector 1ul (vector농도 100-150ng/ul ) 1번 resuspend
2. water bath에 42도 45초 heat shock
3. ice 2min
4. Amp 없는 LB broth 를 900ul 넣음
5. 37도 1hr shaking incubation
6. Centri (9k 1min) 돌리고 상층액 400ul 제거후 resuspending
6. 나머지 400ul 배지(+Amp)에 넣고 spreading
이렇게 진행했습니다.
같은 조건으로 다른분이 실험을 진행했을 땐 colony가 잘 떴는데 같은 vector에 같은 배지, 같은 조건인데 제가 하니까 colony가 하나도 안뜨네요.. 실험과정은 정확하게 진행했다 생각했는데 뭐가 문제일까요.?
Centri 했을 때 pellet을 관찰했으니까 균이 자란거 같기는 한데, 처음에 resuspending 이나 , spreading 시 도말봉을 충분히 식히지 않아서 일까요..?
답답하네요 ㅠ
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