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 전체 > Immunology > Antibody
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질문 PVDF membrane dot blot protocol 확인해주세요
올챙이juyu21(대학원생)  |  03.26 21:26

샘플과 antibody가 반응하는지 검사하고자 합니다. 

원래 dot blot는 NCmembrane으로 해야된다고 알고있지만

실험실에 없고, 구입도 할 수 없어 PVDF로 확인해보고자 합니다.

아래의 방법으로 실험하려는데 방법이 맞는지 확인부탁드립니다.

또한, 샘플은 cell lysis를 마친 암세포인데  실험 전에 100도씨에서 끓여서 사용하는게 맞는지도 답변부탁드립니다.

  1. 연필로 dot blot할 부분을 점 찍어 표시해두기
  2. PVDF를 메탄올에 activation
  3. 3M paper위에 2를 올려 살짝 마르면 1의 부분에 샘플을 농도별로 희석해서 2 uL씩 loading
  4. Dry 1 h
  5. 2% skim milk에 blocking, 1 h, RT
  6. 1st Ab, 1 h, RT
  7. 2nd Ab, 1h, RT
  8. Detection
#dot blot
 
#PVDF memebrane dot blot
 
#antibody
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  03.26 23:34  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
네.. 질문의 방법으로 하면 되고 blocking은 생략해도 됩니다.
대왕개구리SPEED  |  03.27 08:53  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 원래 dot blot는 NCmembrane으로 해야된다고 알고있지만..

: NC, PVDF 모두 가능합니다.

Ag를 올리고 dry만 잘하면 별 문제 없이 dot blot 결과가 나옵니다.

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