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질문 효소 활성 구할때 희석배수 질문드려요!
올챙이해징(대학원생)  |  03.26 21:11

안녕하세요. 박테리아 배양 후 상층액을 가지고 효소 활성을 측정하고 있습니다.

다름이 아니라 효소 활성을 구할때 희석배수를 곱해주는데 헷갈리는 부분이 있어 질문 드립니다.

총 반응액은 500 ul 인데 상층액을 462.5 ul 넣어주었습니다.

그리고 assay에는 100 ul 를 사용하였는데 이렇게 되면 희석배수가 4.625가 맞나요??

아니면 500 ul를 가지고 계산을 해서 5가 맞나요?

너무 기본적인 질문이면 죄송합니다 ㅠ 선배가 없는 실험실이라 물어볼 사람이 마땅치가 않습니다ㅠ 감사합니다!

#효소
 
#protein
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  03.27 08:44  

1. 총 반응액은 500 ul 인데..

2. 그리고 assay에는 100 ul 를 사용하였는데..

효소 반응의 용어에서 반응액과 assay는 동일한 의미입니다.

따라서 총반응액이 500ul인데 assay가 100ul라는 것은 질문이 잘못된것

같습니다.

 

올챙이해징  |  03.27 23:17  

물질 반응 총 볼륨은 500 ul 였고 거기에 상층액을 462.5 ul 넣었습니다.

 

그리고 환원당을 찍을때 거기에서 100 ul를 따서 찍었는데 이와 같은 상황에서의 희석배수를 알고 싶습니다 ㅠㅠ

대왕개구리SPEED  |  03.28 09:11  

상층액 462.5ul 를 사용하여 반응 후 100ul를 OD측정에 사용했다면 462.5ul에

대한 흡광도 입니다.

효소 반응 후 흡광도는 100ul를 사용하는 경우와 200ul를 사용하는 경우 값이

동일하게 나옵니다.

만약 희석을 했다면 희석배수를 곱하면되는데 100ul 흡광도를 어떤 방법으로

측정했나요?

올챙이해징  |  03.28 22:36  

저는 환원당을 copper-bichinconate? 그 방법으로 측정하였습니다!

100 ul sample과 100 ul 반응액을 넣어서 측정하였습니다

대왕개구리SPEED  |  03.29 09:25  

총반응액이 500ul라고 했는데 마지막 글에는 sample 100ul에 반응액 100ul를

넣어서 측정했다고 설명했는데 용어를 정확히 사용해 주세요.

용어에 혼동이 있으니 계산하기가 힘듭니다.

효소 실험에서 반응액이란 sample이 들어간 용액입니다.

따라서 반응액에 다시 sample을 넣는다는 것도 잘못된 설명입니다.

실험의 정확한 protocol을 봐야지 계산이 가능할것 같습니다.

올챙이해징  |  03.30 17:07  

죄송합니다. 제가 잘 몰라서 용어 설명을 제대로 못 하는거 같습니다 ..

 

반응 조건은 sucrose, na-ac buffer, 상층액을 넣고 total volume 500 ul 입니다.

 

그리고 그 중 환원당 측정을 위하여 100 ul를 따서 copper-bicinchonate 시약 100 ul와 반응 시켜서 흡광도를 측정하였습니다.

이러한 조건으로 실험했을 때 효소의 희석배수를 알고 싶습니다.

 

혹시나 설명이 또 이상하다면 말씀해주시면 감사하겠습니다 ㅠㅠㅠ..

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