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HPLC를 이용하여 아미노산을 분석하려는데 애로사항이 있습니다.
레벨2 chill (대학생)
안녕하세요
이번에 HPLC를 이용하여 아미노산 몇 가지를 분석하려는 학생입니다.
사용하는 장비는 Agillent 社 장비입니다.
아미노산은 크게 L-Glutamic acid와 gamma-aminobutyric acid를 분석하려고 합니다.
시료전처리는 FMOC-Cl(9-fluorenylmethoxycarbonyl chloride)를 이용하여 유도체화 후 사용하였으며
용매는 50mM Sodium acetate : methanol : ACN= 82 : 8.5 : 8.5
50mM Sodium acetate : methanol : ACN = 22 : 38.5 : 38.5
위와 같은 조건으로 동일 유도체화 시약을 사용한 참고문헌에 따라 제조하였습니다.
컬럼 : C18 5um 4.6 x 250mm
온도 : 40
유속 1mL / min
분석시간 : 30분
구배조건 : X
A 30 : B 70
detector : UV - 265 nm
FLD - Ex = 254, Em = 322
다만 참고문헌에는 용매에 THF (Tetrahydrofuran)이라는 유기용매를 사용하였는데, 보유하고 있지 않아서 해당 용액을 제외하고 분석을 실시하였습니다.
표준물질의 경우 피크와 면적값이 농도에 따라 잘 나와서 샘플에도 적용시켜 보았는데,
다른 잡다한 피크들이 너무 많이 떠서 목적하고자하는 물질을 구분하기가 힘듭니다.
어떻게 해야 피크를 잘 분리시킬 수 있을까요?
선배님들의 조언을 구합니다.
감사합니다.
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