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 전체 > Molecular Biology-DNA > Transformation
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질문 ligation, transformation 후 콜로니 형태가 이상해요
올챙이해징(대학원생)  |  03.25 09:26
첨부파일 파일첨부: KakaoTalk_20200325_092331772.jpg (1.44 MB)
이미지 첨부파일

안녕하세요. 클로닝을 혼자 해보고 있는 초보 석사생입니다.

 

제가 ligation을 한 후 DH5a에 transformation을 하고 콜로니를 확인했습니다.

 

그런데 콜로니가 싱글형태가 아니라 이렇게 여러개가 퍼져있는 형태로 나왔습니다. ( 배양을 하루 이상 하긴 했습니다 ㅠ)

 

이 상태로 나타난 것은 오염된건가요..? 아니면 너무 오래 배양해서 그런건가요?

 

플라스미드 뽑아서 확인해봐야 아는걸까요?

 

너무 쉬운 질문이었다면 죄송합니다 ㅠㅠ 친절하게 설명해주시면 감사하겠습니다. 드디어 클로닝이 된 줄 알고 기대했었는데 지금 너무 실망한 상태라 글이 어수선해도 이해 부탁드립니다!

#dna
 
#클로닝
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  03.25 09:36  

가운데 가장 큰 colony가 palsmid를 가진 colony입니다.

주변의 작은 colony는 위성 colony 라고 부르는 항생제가 분해되어 나온 균이며

plasmid가 없는 균입니다.

위성 colony가 나오기 때문에 TF 후 절대 오랜시간 배양하면 안됩니다.

총 4개의 colony가 나왔고 plasmid를 분리해 봐야 cloning이 되었는지 알수

있습니다.

이쑤씨나 tip으로 가장 큰 colony를 조심스럽게 찍어 배양 후 plasmid를 분리해

보세요.

앞다리CHINyo76_philekorea  |  03.25 11:43  

recombinant DNA (혹은 plasmid DNA) 들어간 것은 Amp registance gene으로부터 Amp를 분해할 수 있는 enzyme 발현이 가능하기 때문에 배양이 되지만 non-transformant는 Amp registance gene이 없어 Amp를 분해할 수 없어 colony를 형성하지 못합니다.

하지만 위의 결과처럼 o/n이상으로 배양하다보면 transformant colony 주위의 Amp 농도가 낮아지는 부분에 non-transformant colony (satllite colony)가 나타날 수 있습니다.

주위 satllite colony 중심에 main으로 판단되는 콜로니를 stricking하여 LB/antbiocis 배양한 후 15-17시간 배양 후 형성된 콜로니로 확인해 보시길 바랍니다.

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