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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blotting 후 항체를 두번 붙이려고 할 때 스트리핑 없이 진행해도 괜찮을까요?
개구리클레엉(대학원생)  |  03.19 15:03

안녕하세요.

western blotting 을 하고, 예를 들어 21kda 의 단백질을 보기 위해 풀 블랏에 항체를 붙이고, 오버나잇 후 2차 붙여서 디텍을 합니다. 

그런데 이거 말고 또 같은 블랏에서 90 kda 의 다른 단백질을 보기 위해 다른 항체를 붙이게 된다면, 즉 첫번쨰 디텍 후 완전히 사이즈도 다르고 위치도 다른 단백질을 보고싶을 때,  꼭 스트리핑 과정이 필요할까요? 

 

#western
 
#stripping
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리Q.E.D.  |  03.19 15:08  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
처음 확인 할 때 90kDa 사이즈 부분이
아무것도 없이 깨끗하면 괜찮아요
Ecl헹구고 그 다음에 붙이세요~

만약 뭔가 있다면 다시 내리거나
스트리핑을 하고 붙이세요

오히려 스트리핑 방법에 따라서
스트리핑 하는게 더 안 좋을 때도 많아요
개구리seraphina  |  03.19 15:10  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

가능합니다만 항체 host를 다르게 사용하는것을 권장합니다.

예를들어, 첫번째 western blot에서 anti-mouse 사용했을 경우, 두번째 western blot 할때는 anti-rabbit이나 anti-goat 등의 다른 타겟으로 보는것을 권장합니다.

개구리클레엉  |  03.19 15:19  

두분 다 답변 감사합니다^^

저희 연구실 스트리핑 조성(100mM 2-ME, 1%SDS, 62.5mM Tris(pH 6.7))이 약간 강한듯하여 스트리핑을 하게되면 제가 보고자 하는게 많이 떨어져나가는게 아닐까 하는 생각이 들어 스트리핑이 걱정되었었습니다ㅠㅠ

항체 origin 비교 후 2차 다른 것들 끼리 섞어서 붙여보도록 하겠습니다^^ 

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