실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
GST-Tagged protein purify에서 Elution이 안됩니다 ㅜㅜ
레벨1 eurofighter (대학원생)
안녕하세요.
현재 GST_tagged protein을 purify하던 중, 해결되지 않는 문제가 발생하여 이렇게 올립니다.
GST separose bead사용하여 Rotator 사용하여 O/N으로 Incubating하고, Wash한 후, Bead에 Elution Buffer를 넣고 Rotator사용하여 O/N동안 Elution하는 식으로 진행하는데요.
Elution하고 난 후 남은 Bead와 Elution된 용액을 SDS PAGE로 gel을 달리고, 코마시 스테이닝으로 봤을때,
Bead에서만 밴드가 관찰되고, Elution용액에서는 밴드가 나오지 않더라구요 ㅜㅜ
Elution은 첫번째 시도에는 PBS(pH7.4) + L-Glutatione reduced를 (1ml에 10mg) 녹여서 사용했고
두번째 시도에는 50mM Tris-cl (pH8.0) + L-Glutatione reduced를 (1ml에 10mg) 녹여서 사용했습니다.
무슨 문제인지 모르겠어요. 왜 Elution이 안되는지 모르겠습니다 ㅜㅜ
고수님들 해결책을 알려주시면 감사하겠습니다. ㅜㅜㅜ
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