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세포 계수하는게 궁금하시다면
hemocytometer로 검색하시면 여기나 구글에 상세하게 나와있습니다.
아니면 요즘은 자동으로 계수해주는 cell counter가 잘 나오니
이용가능하시다면 사용하시면 됩니다.
hymocytometer 원리나 계산법으로 검색을 추천드립니다.
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레벨1
해브어굿타임
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20.03.12 17:12
저는 5x5칸이 선명하게 보이면
4개의 귀퉁이와 가운데를
좌상법(왼쪽과 위쪽에 걸친 세포는 counting하고, 오른쪽과 아래쪽에 걸친 세포는 no counting)
으로 계산해서 세포 수를 셉니다..
만약 cell pellet을 3mL의 Growth media에 희석시킨 후
여기서 10μL를 hemocytometer에 loading하여 세포 수 counting 시
5개 칸의 세포 수가 62개였다면
1mL 당 세포 수 = Hemocytometer의 총 세포 수(5칸×5)×희석배율×104
공식에 대입하여
62 x 5 x 3 x 104 cells/mL
= 9.3 x 106 cells/mL
(1mL에 9.3 x 106개의 세포가 있다는 말이 됩니다.)
그런데 먼저 세포 수 counting을 공부하시기 전에
현미경 사용법을 아시는게 중요하다고 생각합니다!!
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레벨5
동물사랑 *^^*
(과기인)
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20.03.13 08:56
헤브어굿타임님 감사합니다. 이해 했습니다.
그럼 150파이에 30ml메디아
90파이 10ml
6well에 2ml
12well 1ml
23well에 0.5ml가 들어 간다고 할 때
세포가 자란 배양액은 얼마씩 넣어야 하나요..
각 디쉬마다 추천하는 세포 갯수가 있습니다.
구글에 검색 해보면 바로 나올테지만
대략 6well -> 1~3 x 10^5 cells/well
대략 24well -> 0.5 ~ 1 x 10^4 cells/well
이렇게 합니다.
꼭 구글이나 실험하고자 하는 세포를 사용한 논문을 참고하여 세포 수를 조절 하세요. 세포마다 크기가 다르고 성장 속도가 달라 초기 세포를 배양하는 수가 다릅니다.
간략하게 셀 카운팅 하는 법 알려드리면,
헤마토사이토미터가 크게 3x3 (9) 칸 으로 나뉩니다. 좌상/우상/좌하/우하 이렇게 4군데를 카운트 한 후 (예로 160개) 에 4로 나누면
(160/4 = 40)x10^4 cells/mL 입니다.
6well 에 3x10^5 cells/well 로 깔고 싶다면,
(3x10^5)/(40x10^4) * 1000 -> 750 uL 를 6well의 한 well에 넣고
나머지 1250 mL를 채우면 well 당 3x10^5의 세포가 배양 되게 됩니다.