실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
cDNA 합성시 RNA 농도계산..
레벨2 ddw604 (대학원생)
real time pcr을 진행하기위해서 cell에서 RNA를 추출하고, cDNA를 합성하려고 합니다.
사용하고 있는 cDNA 합성 kit의 권장 RNA 는 1ug입니다.
260nm에서 Absorbance로 계산을 하는데,
RNA원액을 250배 희석하여
260nm에서 흡광도가 0.606이 나왔습니다.
(순도는 1.0 입니다. 좀 낮게 나왔죠ㅠㅠ)
암튼 일단 계산을 해보면 260nm흡광도 값이 1 일때 RNA농도가 40ug/ml니까
비례식으로 1:40 = 0.606 : x 로 하면 x값이 24.24ug/ml가 나오고,
250배 희석했으므로 원액 RNA의 농도는 6060ug/ml가 나옵니다.
우리는 1ug의 RNA가 필요하니까, 또 비례식으로 풀면
원액 RNA가 0.165ul일 때 1ug이라는걸 알 수 있었습니다.
문제는 0.165ul를 취할 수 없는 것인데,,(너무 양이 적어서)
이럴땐 어떻게해야하는 것인가요?
생각해봤는데
250배 희석한 RNA의 농도가 24.24ug/ml니까
25배 희석한 RNA의 농도는 242.4ug/ml일 것이고,
이 농도로 계산하면 1ug의 RNA를 얻으려면 4ul가 필요하니까
cDNA 합성시, 원액 RNA를 첨가하는 것이 아니라, 25배 희석한 RNA를 4ul
첨가해서 합성해도 되는 것일까요..?
질문이 좀 복잡했는데 도와주시면 감사하겠습니다..
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