실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > mRNA Analysis
Realtime PCR 질문있습니다!
레벨3 구구갸갸 (대학원생)
Realtime PCR을 진행을하는데 픽이너무안떠서요 ㅠ_ㅠ 도움부탁드립니다!
진행순서는
프라이머(10Pm) Reverse, Forward, SBYR를 한 튜브에 넣어 섞은후 가벼운볼텍싱
CDNA를 DEPC Water에 섞은후 PCR plate에 6ul씩분주후 혼합한 프라이머를 9ul씩 분주후 total volume 15ul
125 RCF로 2분정도 Centrifuge한다음에 PCR 을진행을하였는데
GAPDH는 잘나오는데 나머지 프라이머들이 너무안나오네요아예 픽이안뜨고 none 으로뜹니다.. Gradient를 먼져 진행을한다음 그 TM값으로 Realtime PCR을 진행을하는데 Gradient에서는 픽이뜨는데 왜 Reatime PCR만 진행하면 아예 픽이안뜰까요 GAPDH는 잘뜨는 걸로봐서는 CDNA문제는아닌거같고 Gradient 에서 뜨는걸봐선 primer문제도아닌거같구.. 그냥 단순히 기술적인 문제가 클까요??
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