실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
western blot 사진좀 봐주세요 ㅠㅠ
레벨1 음음 (대학원생)
안녕하세요
한창 웨스턴을 진행중 입니다.
여러 안티바디를 테스트중인데 그중 하나가 계속 첨부한 사진처럼 결과나 나옵니다.
스트리핑후 다른 안티바디를 붙여보면 예쁘진 않아도 밴드모양은 나오구요..
제 선행연구자의 결과를 찾아보니, 같은 마우스와 같은 안티바디에서 결과나 나온것을 찾을수 있었습니다.
전 무엇이 문제일까요..
실험과정은 아래와 같습니다.
-1'Ab: cell signaling #2192 (23kda (C-terminal fragment). 54kda (full-length))
- samlpe : whole brain + RIPA+protein inhi cocktail
- Heating 100℃ 10min
- 80V 1h 30min running (bio rad 10% gel/ 20ug loading)
- transfer 7min ( bio rad turbo Trans-Blot _ PVDF transfer pack)
- blocking 1hr (5% skim milk)
- washing 10min*3 (1x tbst)
- 1'Ab over night [(1:1000) / 5% BSA]
- washing 10min*3 (1x tbst)
- 2'Ab 2hr(room tem.)
- washing 15min*4 (1x tbst)
- Detection
웨스턴 경험이 많지않아, 안티바디 문제인지 실험 과정이나 sample의 문제인지, 안티바디를 바꾼다고 나오긴 할지 감이 잡히질않습니다...
연구자님들 조언부탁드립니다 ㅠ
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