실험 Q&A Microbiology > Bacteria
qPCR standard curve관련 질문드립니다.
레벨1 치즈맛후추 (대학생)
안녕하세요 이공계 대학원생입니다.
PCR기기는 biorad를 사용하고 sybr green 을 이용합니다.
이번에 균을 이용해서 qPCR standard curve를 그리는데 cq값이 이상합니다....
특정균에서 DNA를 추출해서 10배씩 희석해서 희석배수 10^0~10^6 의샘플을 만들어서 PCR을 진행했습니다. 결과에서 보시면 10^5, 10^6에서의 cq값이 36이상나왔는데 이건 희석배수가 너무 커서 농도가 낮아서 나오지 않았는가보다 하고 해석했습니다. 문제는 희석을 하지 않은 10^0농도에서도 cq값이 37이 나오네요.....ㅜㅜ
첨부한 사진의 standard curve의 R^2값이 0.99인 이유는 빨간색으로 하이라이트한 값은 그래프에 넣지 않아서 그렇습니다. 저렇게 튀는 세개의 값을 빼면 curve가 괜찮은데 왜 이런 결과가 나오는지 아실까요.
참고로 같은 균으로 세번이나 했는데 희석하지 않은 10^0의 cq값은 항상 튀어서 나오네요 혹시 아시는 분들 계시면 답변 꼭 좀 부탁드립니다!!
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