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질문 Enzyme assay에서 NADPH의 extinction coefficient
알수바기(대학생)  |  03.07 17:48

안녕하세요

BL21(DE3)에서 발현 시킨 NADPH dependent Reductase 효소를 정제 후 이제 Assay로 activity를 확인 하고 있는 대학원생 입니다...

제 실험은 NADPH와 NADP의 340nm에서 흡광도 차이로 Activity를 보는 것 인데,

다른 논문에 인용된 정보의 NADPH 농도를 베이스로 잡을려고 0.2mM NADPH의 농도로 시작하였습니다.

340nm에서 NADPH의 Extincion coefficient 값이 6.22mM-1cm-1 또는 6220M-1cm-1로 나와 있는데

제가 측정 한 값은

10mM(1mL) 짜리 NADPH stock을 3mL에 0.2mM만큼 (20ul) 첨가 하였을때 340nm에서 Abs 값이 0.360 정도 나왔습니다.

이 값은 A=e*c*l 값으로 계산 하였을때

대략 0.0579mM 정도 나옵니다... 왜 이러한 값으로 떨어지는지 이해가 잘 안가는데 혹시 제가 실수하거나 다른 방법이 있는 것인가요?

#Enzyme assay
 
#Enzyme
 
#NADPH
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