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질문 gelatin zymography 결과 band가 뜨지 않아요
알BoAzzang(대학원생)  |  03.05 16:30
첨부파일 파일첨부: 자이모모.jpg (257 KB)
이미지 첨부파일

https://www.abcam.com/protocols/gelatin-zymography-protocol

시약들은 위의 링크에 있는 abcam 레시피대로 제조해서 7.5% gelatin gel 만들었구요 media가 아닌 lysis buffer를 이용해서 (1% NP-40대신 0.1% triton X-100) cell collecting한 후 cfg하고 supernatant만 collecting한 다음 5X sample buffer랑 섞어서 gel loading했습니다. incubation은 37'C 48시간 했어요

 

Western blot으로 MMP1, 5, 7 모두 나와서 zymography로 2랑 9를 보려는데 안나오네요..

처음 해보는 실험이라 trouble shooting을 잘 못하겠는데 뭐가 문제인지 짚어주신다면 감사하겠습니다 ㅠㅠ

#zymography
 
#gelatin
 
#MMP
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  03.05 16:40  

gel에 gelatin을 넣었나요?

알BoAzzang  |  03.05 16:57  

넵 recipe대로 

1.5M tris ph 8.8 2ml/ 30% acrylamide 2mL/ DW 2mL

Gelatin(4mg/mL) 2mL, SDS, APS, TEMED 넣어서 seperating gel 만들었어요

대왕개구리SPEED  |  03.05 17:47  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

gel을 보니 gelatin이 안들어간것 같습니다.

gel에 정상적으로 gelatin이 들어가면 아래 사진처럼 보입니다.

upload_image

알BoAzzang  |  03.06 10:18  

감사합니다 ㅠㅠ 다시 제조해서 처음부터 해보겠습니다!!

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