실험 Q&A Cell Biology > Cell lysis/Apoptosis
mammalian cell prep 도움 받고싶습니다!
레벨1 cunDO (대학원생)
안녕하세요! 아직 부족한 부분이 많은 대학원 1학년 학생 입니다.
mammalina cell에서 chromosomal을 prep하는 실험을 하고 있는데, pellet이 잘 안풀리고, 농도가 낮게 나와서 도움을 받고자 이렇게 게시물을 올렸습니다.
제가 진행한 실험 과정은
1. cell 준비
2. cell down & 1xPBS로 wash
3. lysis buffer (RIPA buffer) 로 cell pellet을 풀어준 후, 50℃ o/n
4. phenol down (+RNase A)
5. ethanol down (100% -> 70%)
- 100% ethanol + 3M sodium acetate (10x) 추가 해준 후, -70℃ 2hr -> down -> 70%
6. resuspension pellet in TE
이 과정으로 진행하였습니다. ethanol down 후 pellet을 resuspension 해줄 때 잘 안녹습니다 ㅠㅠ
충분히 말려 준 후 resuspension을 진행 하였고, TE buffer를 넣어 준 후 50℃에서도 녹여봤는데 잘 안녹아요,,, 당연히 농도도 낮게 나오구요,, 혹시 제가 진행한 protocol에 문제가 있을까요? 이유를 아시는 분 계시면 도움 받고 싶습니다 ㅜㅜ
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