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질문 b16f10 melanin 함량 측정 ㅠ
알bbbbb(대학원생)  | 2020.03.02 20:48

안녕하세요 이제 세포실험을 한지 이주째인 초짜 대학원생 인데요

제가 b16f10을 가지고 melanin 측정을 하고 있는데 잘 안됩니다 ㅠㅠ

우선 method는 

1. 6well plate 2*10(5) seeding 후 overnight

2. 양성대조군으로는  arbutin을 쓰고(50,100,200,400 ug/ml)(method 적립을 위해 이렇게 진행했습니다.) a-msh 100nM을 처리후 48h 배양

3. pbs washing 후 tripsin-edta를 이용하여 세포를 뗀후 eppen tube에 옮겨 담기

4. 원심분리 13000rpm 5min 하여 pellet 만 남긴후 1N NAOH(10% DMSO) 130um 첨가 후( pipetting 으로 pellet 풀었습니다.) 80도 1h 가열

5. 다시 원심분리 13000rpm 5min 하여 상등액 405nm 측정

 

이렇게 진행하고 있는데 method가  적절한가요? ㅠㅠ

arbutin 농도대로 흡광도 값이 잘 안나와서요 ㅠㅠ 

#b16f10
 
#melanin
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리당구왕빠킹  |  2020.03.03   

멜라닌 색소가 형성되는 것이 눈에 보이나요? arbutin 농도별 결과값이 어떻게 측정되나요?

알bbbbb  |  2020.03.03   

계대를 7번? 정도 진행하고 실험을 행하였는데

그전까지는 pellet이 연회색이였는데 이번꺼는 아이보리 색이 되더군요 ㅠ

pellet 색은 a-msh때문인지 arbutin 농도별로 연해졌었습니다.

그런데 흡광도 값에서는 농도별로 순차적으로 나오진 않더군요 ㅠ

피부가 검으면 어때서  |  2020.03.03    

저도 현재 한국세포주 은행에서 B16F10세포 분양하여 실험 setup 중에 있는데

a-MSH 처리하여도 Melanin content 실험시 가장 높은 흡광도가 0.2 정도 라 실험이 진행 되고 있지 않습니다. ㅠㅠ

 

a-MSH의 경우 0.1, 1, 10 uM 까지도 처리해 보았지만 셀이 약간 갈색을 띄고 있어요 ㅠㅠ

계대배양시에는 세포가 거의 흰색이라 더 걱정입니다. ㅠㅠ

셀이 망가진것인지....ㅠㅠ 새로 분양 받아야 할까요?

개구리닥눈삼  |  2020.03.04   

세포의 신호전달 과정은 매우 복잡하다는 것을 알고 계시죠? 세포에 약물을 농도별로 처리했다고 그 반응이 농도에 맞게 딱 떨어지게 나오진 않습니다. 질문자님의 경우, arbutin을 2배씩 단계적 희석하였으니 흡광도 값도 2배씩 단계적으로 차이가 나야하지 않나?라고 생각하시는 것 같습니다. 세포 실험은 세포의 반응을 보는 것이기 때문에 해당 농도 범위에서 적절한 arbutin 농도를 잡는 정도로 실험을 진행하시면 될 것 같습니다.

알bbbbb  |  2020.03.04   

답변해주신 분들 모두 감사합니다.

arbutin 농도대로 흡광도 값이 나올 정도론 바라진 않는데,,

c군(무첨가군)도 흡광도 값이 0.01 정도 밖에 나오질 않아서요 ㅠㅠ

혹시 melanin 측정 실험을 하실때 naoh를 넣고 가열후 원심분리하여 상등액만 흡광도 측정을 하는게 맞나요?? 상등액만 했을때 흡광도 값이 너무 나오질 않아서..

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