[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
랩박스 - 형광 이미징의 모든 것
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Cell Biology > etc.
조회 628  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 b16f10 melanin 함량 측정 ㅠ
알bbbbb(대학원생)  |  03.02 20:48

안녕하세요 이제 세포실험을 한지 이주째인 초짜 대학원생 인데요

제가 b16f10을 가지고 melanin 측정을 하고 있는데 잘 안됩니다 ㅠㅠ

우선 method는 

1. 6well plate 2*10(5) seeding 후 overnight

2. 양성대조군으로는  arbutin을 쓰고(50,100,200,400 ug/ml)(method 적립을 위해 이렇게 진행했습니다.) a-msh 100nM을 처리후 48h 배양

3. pbs washing 후 tripsin-edta를 이용하여 세포를 뗀후 eppen tube에 옮겨 담기

4. 원심분리 13000rpm 5min 하여 pellet 만 남긴후 1N NAOH(10% DMSO) 130um 첨가 후( pipetting 으로 pellet 풀었습니다.) 80도 1h 가열

5. 다시 원심분리 13000rpm 5min 하여 상등액 405nm 측정

 

이렇게 진행하고 있는데 method가  적절한가요? ㅠㅠ

arbutin 농도대로 흡광도 값이 잘 안나와서요 ㅠㅠ 

#b16f10
 
#melanin
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리당구왕빠킹  |  03.03 01:08  

멜라닌 색소가 형성되는 것이 눈에 보이나요? arbutin 농도별 결과값이 어떻게 측정되나요?

알bbbbb  |  03.03 12:53  

계대를 7번? 정도 진행하고 실험을 행하였는데

그전까지는 pellet이 연회색이였는데 이번꺼는 아이보리 색이 되더군요 ㅠ

pellet 색은 a-msh때문인지 arbutin 농도별로 연해졌었습니다.

그런데 흡광도 값에서는 농도별로 순차적으로 나오진 않더군요 ㅠ

피부가 검으면 어때서  |  03.03 16:31   

저도 현재 한국세포주 은행에서 B16F10세포 분양하여 실험 setup 중에 있는데

a-MSH 처리하여도 Melanin content 실험시 가장 높은 흡광도가 0.2 정도 라 실험이 진행 되고 있지 않습니다. ㅠㅠ

 

a-MSH의 경우 0.1, 1, 10 uM 까지도 처리해 보았지만 셀이 약간 갈색을 띄고 있어요 ㅠㅠ

계대배양시에는 세포가 거의 흰색이라 더 걱정입니다. ㅠㅠ

셀이 망가진것인지....ㅠㅠ 새로 분양 받아야 할까요?

개구리닥눈삼  |  03.04 00:11  

세포의 신호전달 과정은 매우 복잡하다는 것을 알고 계시죠? 세포에 약물을 농도별로 처리했다고 그 반응이 농도에 맞게 딱 떨어지게 나오진 않습니다. 질문자님의 경우, arbutin을 2배씩 단계적 희석하였으니 흡광도 값도 2배씩 단계적으로 차이가 나야하지 않나?라고 생각하시는 것 같습니다. 세포 실험은 세포의 반응을 보는 것이기 때문에 해당 농도 범위에서 적절한 arbutin 농도를 잡는 정도로 실험을 진행하시면 될 것 같습니다.

알bbbbb  |  03.04 13:29  

답변해주신 분들 모두 감사합니다.

arbutin 농도대로 흡광도 값이 나올 정도론 바라진 않는데,,

c군(무첨가군)도 흡광도 값이 0.01 정도 밖에 나오질 않아서요 ㅠㅠ

혹시 melanin 측정 실험을 하실때 naoh를 넣고 가열후 원심분리하여 상등액만 흡광도 측정을 하는게 맞나요?? 상등액만 했을때 흡광도 값이 너무 나오질 않아서..

답변하기
할인행사 광고 검색광고
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
nanoString Panel Discount Promotion (~6월15일까지)!!! (6.16까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN] Reading과 형광 Imaging을 하나의 장비로 한 번에!! [Multi-mode mic.. (6.20까지)
케이비티 케이비티
[KBT] Rotator, Thermo Mixer, Ultrasonicator, Stirrer 등 기본 실험.. (6.30까지)
셀레믹스 셀레믹스
BTSeq Contiguous Sequencing 서비스 런칭 이벤트 - 무료 분석서비스(1만 마일리지) 제.. (6.30까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
[에펜도르프코리아] Eppendorf 2020 상반기 프로모션 안내 : 실험실 필수품 피펫,원심분리기,PCR.. (8.8까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
1/6  좌우
739,000702,100
136,000129,200
468,000421,200
493,000443,700
125,500119,300
339,400322,500
79,50075,600
66,50063,200
773,000734,400
870,000
17,00014,500
109,00098,100
139,000132,100
93,20088,600
52,60050,000
23,00019,600
49,00041,700
47,20044,900
924,000
482,000433,800
6,0005,100
92,30087,700
482,000433,800
370,000333,000
최근등록   더보기 >
막단백질 정제 중 detergent를 어떤 식으로 제거하나요???   06.03
세균 성장곡선 측정   06.03
미생물 균주 분양 요청   06.03
Hs27 cell 분양 가능하시거나 국내 구매처를 알고싶습니다   06.03
LC-MS/MS column 사용시   06.03
HMC-1셀에 PMA처리 결과좀 discussion 부탁드립니다!   06.03
media 교체 시 PBS washing   06.03
마우스 실험관련   06.03
고체배지에 휴대폰균을 배양하여 육안으로 보이는 것이 정말 휴대폰에 있는 세균이 맞나요?   06.03
Sumo 정제   06.02
그린메이트바이오텍
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크