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Native gel 실험 관련 질문
레벨1 임콩 (대학원생)
안녕하세요!
현재 A와 B protein을 정제해 complex 확인을 위해 native gel을 만들어 전기영동중에 있습니다.
native gel 실험이 까다로워 쉽지 않다고는 들었지만 막막해서 질문남기게 되었습니다 ㅠㅠ
우선 1번 결과 test는 sds-page 실험때와 비슷한 조건으로 staking gel과 12% running gel (각각 pH 6.8/8.8) 만들어 내려보았지만 protein이 보이지 않았습니다 ㅠ (100V에 1시간30분가량 내렸습니다)
이 상황에서는 단백질이 다 빠져나간건지 staking gel 부분에 걸린건지 궁금합니다.
2번때 실험에는 조건을 완전 바꿔 pH8.8의 4% running gel로만 제작하여 100V에 40분정도만 내려보았는데 이건 꼭 stacking gel에 다 걸린것만 같네요..
(참고적으로 두 실험 모두 첫번째 보이는 marker는 sds dye로 로딩했습니다.)
SDS는 buffer, gel, dye 모두 제외시켰고 denature 시키지 않고 바로 dye섞어 내렸습니다.
(*참고적으로 protein들의 pi값은 아직 확인하지 못했습니다...)
실험 관련 시도해볼 다른 방법이나 관련 조언주시면 감사하겠습니다 ㅠㅠ
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