실험 Q&A > Buffer/Reagent
sodium phosphate/imidazole buffer만들때 문의드립니다
레벨4 졸업은언제하나 (대학원생)
안녕하세요^^
IMAC 정제시 washing과 elution buffer로 50 mM sodium phophate/300 mM NaCl buffer에 Imidazole을 농도별로 사용하는데요..(pH 8)
저의 경우, Monobasic과 Dibasic으로 pH를 맞춘 후 NaCl과 Imidazole을 넣고 pH를 다시 적정 후 마무리합니다.
(500, 300, 200, 100, 50 mM로 나누어 사용합니다)
이 전에는 정제에 필요한 농도를 찾으려고 한번에 버퍼를 만들지 않았어서 별생각 없이 만들어서 그때그때 사용하였는데요..
다른 분들은 한번에 여러 농도의 imidazole이 들어간 시약을 만들 때 어떤식으로 만드시나요?
1. 각각 비커에 농도에 해당하는 imidazole, nacl을 넣고 mono-와 di- 용액을 부워서 pH를 맞춘다.
2. 1 M이나 500 mM imidazole/50 mM sodium phophate/300 mM NaCl buffer에서 stock에서 serial dilution 하듯 50 mM sodium phophate/300 mM NaCl buffer로 희석해서 사용한다.
(이 경우는 희석 한 후에 pH를 다시 확인하시는지..?)
저는 보통 1번의 방식으로 하나하나 따로따로 만드는데,
QiaExpressionist 보니까 농도만큼의 NaH2PO4(H2O), NaCL, Imidazole을 넣고 NaOH로 적정하라고 되어있던데..
보통 일반적인 방법이라고하면 어떤 것이 일반적인 방법인가요? ㅜ ㅜ?
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