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질문 sodium phosphate/imidazole buffer만들때 문의드립니다
앞다리졸업은언제하나(대학원생)  |  02.26 22:37

안녕하세요^^

 

IMAC 정제시 washing과 elution buffer로 50 mM sodium phophate/300 mM NaCl buffer에 Imidazole을 농도별로 사용하는데요..(pH 8)

저의 경우, Monobasic과 Dibasic으로 pH를 맞춘 후 NaCl과 Imidazole을 넣고 pH를 다시 적정 후 마무리합니다.

(500, 300, 200, 100, 50 mM로 나누어 사용합니다)

 

이 전에는 정제에 필요한 농도를 찾으려고 한번에 버퍼를 만들지 않았어서 별생각 없이 만들어서 그때그때 사용하였는데요..

다른 분들은 한번에 여러 농도의 imidazole이 들어간 시약을 만들 때 어떤식으로 만드시나요?

 

1. 각각 비커에 농도에 해당하는 imidazole, nacl을 넣고 mono-와 di- 용액을 부워서 pH를 맞춘다.

 

2. 1 M이나 500 mM imidazole/50 mM sodium phophate/300 mM NaCl buffer에서 stock에서 serial dilution 하듯 50 mM sodium phophate/300 mM NaCl buffer로 희석해서 사용한다.

(이 경우는 희석 한 후에 pH를 다시 확인하시는지..?)

 

저는 보통 1번의 방식으로 하나하나 따로따로 만드는데,

QiaExpressionist 보니까 농도만큼의 NaH2PO4(H2O), NaCL, Imidazole을 넣고 NaOH로 적정하라고 되어있던데..

 

보통 일반적인 방법이라고하면 어떤 것이 일반적인 방법인가요? ㅜ ㅜ?

 

 

#phosphate buffer
 
#imidazole
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