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질문 sp20 cell thawing 과정좀 확인해주세요
올챙이sh1227(대학원생)  |  02.26 19:29

오늘 sp20 cell을 60파이 디쉬에 thawing 했습니다. 문제는 너무 빨리 자라서 60파이 2개의 plate에 나누어서 해보았습니다.

제가 thawing 한 방법이 맞는지 어떠한 점이 잘못되었는지 확인좀 해주세요

1. vial을 녹인 후. 배지를 넣고 suspension 

2. 원심 분리를 하고 나서, 석션한 후에 ,pellet을 tapping

3. pellet이 있는 곳에 media 3ml을 넣어준 후,60파이 디쉬에 media 2ml을 넣어주고 , 현탁액을 1ml을 넣어주었습니다.

그런데 현미경을 봐도 너무 cell이 많아서 어떻게 해야 할지 문제입니다.

#thawing
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  02.27 10:14  

본인이 얼리신 셀이 아닌가보죠?

얼릴때 얼마의 셀을 이용해 stock을 했는지가 중요할것 같습니다.

만약 잘자란 60mm 디쉬를 1판을 이용해 1바이알을 얼렸고, 생존률이 좋다면 풀자마자 꽉 차 있는 모습이 되겠죠.

셀을 풀었는데 너무 많은 감이 있다면 더 큰 디쉬나 플라스크에 나눠 주시면 됩니다.

sp2/0 셀은 잘 자라는 편에 속합니다. 저는 75T 플라스크를 이용했고 배지는 15ml 정도 넣어 배양했었습니다. 스플릿 주기는 1주일에 2번~3번 정도로 맞춰 배양했었네요...

대왕개구리SPEED  |  02.27 10:25  

cell이 너무 없는 것이 문제가 되며 너무 많아 보이면 배지로 희석해서

나머지는 버리든지 배양 갯수를 늘이면 됩니다.

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