[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
물리적 거리두기 실천
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
LABox-과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-DNA > etc.
조회 403  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 고체배지상에서 배양한 fungi의 DNA prep 후 농도가 너무낮습니다ㅜㅜㅜ
알금맘(대학원생)  |  02.26 15:15

고체배지(PDA)에서 배양한 균의 DNA prep을 한 후 nanodrop으로 농도랑 순도를 측정했을때 순도는 좋은데 농도가 너무 낮게나오네요ㅜㅜ 현재 GeneAll Plant SV mini Kit를 사용하고 있습니다! biofact에서 받은 gene extraction kit 샘플을 이용해서도 prep해봤는데 농도가 너무 낮습니다.

균을 고체배지에 배양한 후 균사부분을 1.5ml tube에 수집하여 동결건조시킨 후 비즈를 이용해 갈아준 후 prep에 들어갑니다. 혹시 이렇게 균사를 수집하여 분쇄하는것이 문제가 될까요?

다른 방법이 있다면 댓그 부탁드립니다.

감사합니다!

#fungi DNA prerp
 
#농도
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  02.26 16:06  

1. 1.5ml tube 1개 추출하여 몇 ul에 녹이고 ul당 어느정도 gDNA가 나오나요?

2. 1.5ml에 균사를 어느정도 모아서 추출하나요?

3. gDNA 사용 용도가 어떻게 되나요?

4. 전기영동으로 gDNA를 확인했나요?

알금맘  |  02.27 12:07  

1. 1.5ml tube에 70㎕에 녹이고 농도는 낮은경우 1.4까지도 나옵니다.

2. 1.5ml tube의 1/3 또는 2/3정도 균사가 차도록 넣습니다.

3. PCR하여 genetic diversity를 보기 위함입니다.

4. PCR 후에 전기영동으로 확인했을때 증폭이 되는것도있고 안되는것도 있었습니다. 농도와는 상관없이 나왔습니다

대왕개구리SPEED  |  02.27 12:33  

1. 1.5ml tube에 70㎕에 녹이고 농도는 낮은경우 1.4까지도 나옵니다.

: ml당 몇 ug정도인가요?

2. 1.5ml tube의 1/3 또는 2/3정도 균사가 차도록 넣습니다.

: 균체 집균하듯이 원심분리 후 어느정도 균사양인가요?

4. PCR 후에 전기영동으로 확인했을때 증폭이 되는것도있고 안되는것도 있었습니다. 농도와는 상관없이 나왔습니다

: gDNA 전기영동은 안했나요?

알금맘  |  02.27 17:06  

1. 1.4ng/µl 나오니까 ml당 1400ng 정도 나옵니다.

2. 균체 수집 후 동결건조하여 파쇄하면 1/3정도 차고 거기서 바로 buffer 를 첨가합니다.

4.gDNA 전기영동은 하지 않았습니다

 

대왕개구리SPEED  |  02.27 17:57  

이정도 양이면 거의 추출이 되지 않았습니다.

균사 파쇄 후 바로 kit의 lysis buffer를 넣고 실험하나요?

lysis 할 때 온도를 몇도까지 올려서 실험 하나요?

우선 균사양을 많이 줄여서 실험해야 합니다.

 

답변하기
할인행사 광고 검색광고
케이비티 케이비티
Stirrer, Dry Bath, Shaking Incubator, Thermo Shaker 등을 새롭게 런.. (6.31까지)
크로니텍 크로니텍
[로고스바이오]LUNA 셀카운터 시리즈 소모품 패키지 할인! (5.31까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
3/6  좌우
80,90076,900
60,70057,700
214,400203,700
56,10053,300
184,000174,800
278,400264,500
47,20044,900
79,50075,600
67,10063,800
25,80024,600
49,40047,000
72,90069,300
175,600166,900
274,200260,500
178,700169,800
80,40076,400
441,000419,000
51,40048,900
61,10058,100
57,50054,700
134,500127,800
111,300105,800
226,100214,800
74,00070,300
최근등록   더보기 >
human osteoblast media질문드립니다!   04.07
peptide를 hplc로 분석하는 방법을 알고싶어요ㅠㅠ   04.07
Assay kit 질문드립니다   04.07
디스크확산법 실험 질문드립니다.   04.07
일반적인 단백질의 분리 단계   04.07
슬라이드에 고정되어 있는 샘플에서 DNA 뽑는 방법..   04.07
DNA 동결건조 후 색깔과 형태   04.07
protein expression 할 때 scale up시, 항생제 없이 진행하기도 하나요...   04.07
시퀀싱 의뢰 방법에 대해 문의 드립니다.   04.07
마우스 지노타이핑 버퍼 만들기   04.07
국립암센터
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크