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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot inhibitor 질문입니다.
올챙이잉ㅇ이앙(대학생)  |  02.25 20:11

western blot으로 phospho form 을 보려고 하는데 자꾸 나오지 않아 inhibitor 쪽으로 trouble shooting을 진행하고 있습니다. 

저희 랩에서 사용하는 cocktail은 cell signaling 사에서 만든 protease inhibitor cocktail (x100) #5871 을 쓰는데 이게 아무래도 phosphotase inhibitor가 없는 것 같아서... 문제네요

다른 사람들은 같은 inhibitor cocktail쓰고도 phospho-form이 잘 나온다는데 혹시 같은 inhibitor cocktail 사용하시는 분 있을 까요??

 

또한 EDTA가 phosphotase inhibitor로써 작용도 할 수 있을까요?

#western blot
 
#inhibitor
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대왕개구리SPEED  |  02.25 21:04  

#5871에 phosphotase inhibitor는 포함되어 있지는 않습니다.

phospho form에 inhibitor를 사용하지 않는 연구자들이 간혹 있던데

현재 결과가 잘 안나오니 phosphotase inhibitor를 사용해서 결과를 확인한 후

inhibitor 문제인지 아니면 다른 문제인지 확인하는 것이 좋을 듯 합니다.

앞다리포르말린  |  02.28 17:40  

혹시 western sampling시 cell lysis buffer에 phosphotase inhibitor는 넣어 사용하고 계신가요? sampling시 phosphotase inhibitor cocktail을 넣지 않으면 sampling과정에서 거의 대부분 단백질들이 phosphorylation되어 western blot에서 phospho form을 확인 할 수 없는 것으로 알고 있습니다. 확인 해 보세요.

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