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질문 DAPI 및 FITC형광시약 test 문의
앞다리졸업은언제하나(대학원생)  | 02.25 15:00

안녕하세요^^

 

이번에 암세포 실험 처음들어가는 대학원생입니다.

 

암세포에 형광 시약을 결합한 단백질을 처리하여 결합유무를 확인하려 하는데요...

 

사용하고자하는 시약은 DAPI와 FITC (국내 제품으로 FITC 대체품; 파장대는 비슷)입니다.

 

저희 과에서 보유중인 형광현미경과 위상차현미경으로 보려하는데, 

그 전에 기기내 필터로 촬영이 가능한지 테스트를 해보려합니다.

 

저희가 이전에 연구실에서 보유했던 형광시약이 위상차 현미경 측정범위에서 1-20 nm 정도 차이가 났었는데 측정이 안되어서, 세포 실험 전에 형광 시약만 확인하고 싶습니다.

 

혹시 FITC 형광 시약만 96well 플레이트에 넣고 촬영해도 형광을 찍을 수 있을까요?

아니면 단백질에 형광 붙인 후 세포에 처리 후 워싱하여 찍어야 형광을 읽을 수 있을까요?

 

 

#FITC
 
#형광현미경
 
LABox #Fluorescence
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리Favorite  |  03.12 23:35  
둘다 가능해야합니다.
1번 FITC만 넣은경우 넣지않은 웰에비해 밝게보입니다. 단, 초점을 잡을수없습니다.
2번경우는 1번에 비해 농도가 작아서 발현되고있지만 현미경 성능에 비해서 못보실수도있습니다.
쉽게생각하시면 엄청좋은 망원경은 밤하늘에 토성의 달까지 관찰할수있겠지만 감도가 낮으면 겨우 지구 근처 달정도만 보일겁니다. 렌즈와 광원 그리고 더중요한거누촬영하는 카메라의 감도입니다. 렌즈는 배율만 논할 수도없습니다. NA값도 높아야합니다. 밝기는 NA에 4배이거든요. 카메라도 고감도 카메라여야 데이터를 확보할수있습니다. 라이카 현미경에 7000T나 9000GT같은 카메라 같은것이 고가이지만 고가인 이유는 다 있지요. 카메라성능에 따라 발현하는것을 못보고 실험 실패한줄알고 시료만 자꾸 다시만들거나 다른 이유문제로 잘 셋업 안되었다고 판단할까봐 몇자 적어요. 시료 버리지말고 여러 현미경 특히 주변 고가 현미경으로 시도해보세요. 필요하시면 과에 요청도 해보시고요. 실험 데이터 퀄리티가 달라집니다.
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