실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > Small RNA Analysis
miRNA reverse transcription & assay 질문드립니다.
레벨2 nodneb (대학원생)
안녕하세요. 석사과정 대학원생입니다.
곧 miRNA assay를 할건데, 그 전에 cDNA 합성에 관해서 확인받고 싶어 질문을 드립니다.
1. cDNA를 합성하고 deep freezer (-80도)에 하루 보관했다가 다음 날 PCR 실험을 해도 괜찮을까요?
그리고
2. total RNA로부터 농도 계산해서 역전사 반응을 하기까지 계산 과정을 검토해보려 합니다.
지금 있는 샘플의 total RNA 농도를 먼저 nanodrop으로 쟀더니
260nm/280nm = 1.85, 260nm/230nm = 2.15 가 나왔고요.
농도는 147.66 ng/ul이 나왔습니다.
근데 kit 설명대로 5 ul에 1~10ng의 total RNA가 있어야 한다고 해서
10 ng만큼 있도록 (2 ng/ul) 희석해주려 합니다.
그래서 2 ul total RNA + 145.66 ul RNase free water 해주면 2 ng/ul가 된다... 이 과정에서 혹시 틀린 게 있을까요?
글 읽어주셔서 감사합니다.
Bio마켓 프리미엄