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 전체 > Molecular Biology-RNA > Small RNA Analysis
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질문 miRNA reverse transcription & assay 질문드립니다.
알nodneb(대학원생)  |  02.25 14:05

안녕하세요. 석사과정 대학원생입니다.

곧 miRNA assay를 할건데, 그 전에 cDNA 합성에 관해서 확인받고 싶어 질문을 드립니다.

 

1. cDNA를 합성하고 deep freezer (-80도)에 하루 보관했다가 다음 날 PCR 실험을 해도 괜찮을까요?

 

그리고

 

2. total RNA로부터 농도 계산해서 역전사 반응을 하기까지 계산 과정을 검토해보려 합니다.

 

지금 있는 샘플의 total RNA 농도를 먼저 nanodrop으로 쟀더니

260nm/280nm = 1.85, 260nm/230nm = 2.15 가 나왔고요.

농도는 147.66 ng/ul이 나왔습니다.

 

근데 kit 설명대로 5 ul에 1~10ng의 total RNA가 있어야 한다고 해서

10 ng만큼 있도록 (2 ng/ul) 희석해주려 합니다.

 

그래서 2 ul total RNA + 145.66 ul RNase free water 해주면 2 ng/ul가 된다... 이 과정에서 혹시 틀린 게 있을까요?

 

 

글 읽어주셔서 감사합니다.

#micro RNA
 
#real-time pcr
 
#reverse transcription
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  02.25 14:13  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. 네 보관은 가능합니다. 그러나 cDNA만들고 바로 실험을 진행하시는것을 추천드립니다. 원하던 결과가 안나오면 cDNA를 보관해서 그러나 하는 걱정이 생기거든요

 

2. 네 질문자의 계산이 맞습니다.

알nodneb  |  02.25 20:15  

당일 cDNA 합성하는 걸로 해야겠습니다.

도움 주셔서 감사합니다!

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