[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
제품평가단 모집
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
LABox-과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
조회 785  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Native PAGE 기초적인 질문 드립니다
올챙이Weierstrass(대학생)  |  02.21 16:05
저희 연구실에서 아무도 하지 않았고 프록토콜도 없는 상태입니다.
제가 이번에 하는 연구에서 Native PAGE가 꼭 필요한데 프록토콜도 몰라서 고민이 많습니다ㅜㅜ 찾아봤는데 단백질의 pi 값을 알아야 된다고 하는데..
저는 바이러스 자체를 내릴 생각이라서 어떻게 해야 할 지 고민입니다..
그냥 SDS-PAGE 처럼 해도될까요? 그러면 차지가 안걸리지않을까요....
#Native PAGE
 
#PAGE
 
#Protein
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  02.21 18:08  

pI값과 관계없이 Native PAGE protocol은 정해져 있습니다.

전기영동 시 단백질이 분자량이 아니라 pI에 따라 내려가는 pattern이 달라집니다.

그리고 전기영동은 분자 단위로 분리하는 실험방법이기 때문에 바이러스

자체는 내려가지 않고 분리 자체도 안됩니다.

바이러스 capsid를 1차 분리하고 전기영동하면 capsid 단위 단백질의 전기영동이

가능합니다.

올챙이Weierstrass  |  02.21 18:13  
네 ㅎㅎ 바이러스 내렸을때 구조단백질 각각으로 나오지 않고 바이러스 비리온 그대로여야만 해서요!
개구리DTer  |  02.26 14:00  

실험법을 선택하고 진행하는 절차는 다음과 같습니다.

1. 실험을 하기 전에 분석하고자 하는 분석 대상을 정한다.

2. 분석 대상을 분석하는데 가장 적합한 방법을 선택한다.

3. 분석 대상을 분석하는데 가장 적합한 분석 조건을 선정한다.

4. 선택한 분석방법을 사용하여 적합한 분석 조건에서 분석 대상을 분석한다.

 

PAGE는 어떠한 물질(단백질, 펩타이드, 핵산 단편 등)을 크기에 따라 분리, 분석하는 방법으로, 실험 조건에 물질을 변성시키는 조건 (SDS, beta-mercaptoethanol, 등)을 포함하면 Non-Native PAGE, 변성 조건이 아닌 경우 Native-PAGE라 부른다. Polyacrylamide는 두가지 성분 (acrylamide, bis-acrylamide)으로 만드는데 두성분의 농도와 비율에 따라 만들어지는 pore의 크기가 달라지며, polyacrylamide로 분석할 수 있는 분자량의 범위는 수천 Da~수백 kDa으로 다양하다.

Virion은 생물과 무생물의 중간 개념으로 가장 작은 생물과 무생물의 경계선에 있는 것이긴 하지만, 핵산과 많은 capsid 단백질로 이루어져 있는 거대 분자로 PAGE로는 분리 분석할 수 없다. Virion 자체를 분리하고자 한다면 PAGE가 아니라 virion을 흡착하는 column chromatography를 사용하거나 초원심분리와 같은 방법을 사용하여야 한다.

Virion의 구성 성분인 capsid 단백질을 native한 조건에서 분리하고자 한다면, native PAGE로 분리가 가능하다. 단, native PAGE 시약에는 non-native PAGE와 같이 단백질 전체를 코팅하여 (-)charge를 띠게 하는 SDS가 포함되어 있지 않으므로 전기영동 조건의 pH에서 (-) charge를 띠어야 한다. 그럴러면, 단백질의 pI 값이 전기영동 buffer의 pH보다 낮아야 한다. 왜냐하면 전기영동 조건 (pI 값보다 알칼리 조건)에서 수소이온을 잃고 (-) charge를 띠게 되기 때문이다.

답변하기
할인행사 광고 검색광고
케이비티 케이비티
Stirrer, Dry Bath, Shaking Incubator, Thermo Shaker 등 다양한 제품.. (6.31까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
Eppendorf 2020 상반기 프로모션 안내 : 실험실 필수품 피펫,원심분리기,PCR장비,초저온냉동고,M.. (4.1까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
5/6  좌우
74,50070,800
153,100145,500
69,20065,800
86,90082,600
80,00076,000
12,00011,400
20,40019,400
154,700147,000
195,700186,000
55,70053,000
169,600161,200
52,70050,100
66,50063,200
196,000186,200
39,70037,800
67,10063,800
111,300105,800
47,20044,900
87,40083,100
84,70080,500
50,40047,900
62,00058,900
59,30056,400
317,100301,300
최근등록   더보기 >
fbs 오염   03.30
bacteriophage contamination 의심되는데 확인 방법이 있을까요   03.30
인도메타신 유발 위염 동물모델 질문이에요ㅠㅠ   03.30
sealing material   03.30
Lysis buffer를 필터링 해도 문제가 없을까요?   03.30
SH MDAMB231의 cell line이 뭔가요?   03.30
RINm5F cell 분양해 주실분 계신가요?? 부탁드립니다ㅠㅠ   03.30
FACS cell cycle analysis program을 찾고있습니다.   03.29
센트럴 도그마 질문이요   03.29
deep freezer에 보관하는 bacteria stock을 상온에 하루동안 방치했으면...   03.29
국립암센터
제품평가
[필코리아테크놀로지]
Sapphire Biomolecular Imager
필코리아테크놀로지
모집인원: 10명
모집기간: ~3/31까지
신청조건: BRIC 회원
평가자 혜택

- 참가자 전원 10만원 상품권 제공
- 우수평가자 5명에게 10만원 상품권 추가 제공

제품평가자 모집중
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아