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질문 Acetate buffer 만들기
알베리타스(대학원생)  |  02.19 22:08

안녕하세요,

pH5.4짜리 0.1M acetate buffer를 만들려고 합니다.

프로토콜에는:

1. 800ml DW를 채운다.

2. 6.989g의 sodium acetate를 넣는다.

3. 0.889g의 acetic acid를 넣는다.

4. HCl 및 NaOH로 pH를 조절한다.

5. 물을 1L까지 채운다.

 

위 프로토콜 중 4번과 관련하여 질문이 있습니다.

pH meter를 사용하여 pH를 조절해줄 생각인데, 보통 몇 molar짜리의 HCl 및 NaOH를 사용하여 pH를 조절해줘야 하나요? 그리고 조절할때 drop by drop 넣어주며 pH를 조절하나요? 또 궁금한점은 향후 이 버퍼를 음이온결합크로마토그래피에 사용하려고 하는데 위처럼 HCl 및 NaOH를 넣어주게되면, 이온강도(ionic strength)가 높아져, 이온결합크로마토그래피의 효능이 떨어지지는 않을까요?

감사드립니다!

#버퍼
 
#acetate buffer
 
#이온결합크로마토그래피
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  02.19 22:32  

700ml DW에 NaOAc를 6.989g 넣고 잘 녹인 후 acetic acid로 pH를 맞추고

DW를 1L까지 채웁니다.

그리고 음이온 교환수지에 단백질 정제용으로사용하려면 5배 희석해서

20mM 정도로 사용해야합니다.

그 이상의 농도는 이온강도가 높아서 단백질이 약하게 붙을수 있습니다.

또한 pH5.4를 음이온교환수지에 사용하려면 정제하고자하는 단백질의 pI가

적어도 4 이하는 되어야 음이온수지에 단백질이 결합을 합니다.

알베리타스  |  02.19 22:44  

Speed님 감사드립니다!

혹시 아래 질문도 답변해 주실 수 있나요?

pH meter를 사용하여 pH를 조절해줄 생각인데, 보통 몇 molar짜리의 HCl 및 NaOH를 사용하여 pH를 조절해줘야 하나요? 그리고 조절할때 drop by drop 넣어주며 pH를 조절하나요?

 

또 궁금한점은 향후 이 버퍼를 음이온결합크로마토그래피에 사용하려고 하는데 위처럼 HCl 및 NaOH를 넣어주게되면, 이온강도(ionic strength)가 높아져, 이온결합크로마토그래피의 효능이 떨어지지는 않을까요?

대왕개구리SPEED  |  02.19 22:50  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

만드는 방법은 위 답변에 적었습니다.

HCl, NaOH로 pH를 맞추는 것이 아닙니다.

그리고 100mM buffer 자체가 상당히 높은 이온강도입니다.

희석해서 사용해야 합니다.

 

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