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 전체 > Cell Biology > Cell lysis/Apoptosis
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질문 Western blot, cell lysis
알모레(대학생)  |  02.19 10:39
첨부파일 파일첨부: KakaoTalk_20200219_103345644.jpg (1.56 MB)
이미지 첨부파일

western blot 에서 난항을 겪고 있습니다.

지금 있는 실험실에 제가 들어오기 전에 stock되어있었던 homogenize 및 lysis 되어있던 간세포로 western blot을 해봤을 때는 band가 잘 나왔는데

새로 조직을 갈거나 세포로 western  blot하면 band가 안보여요 ㅠㅠ ㅋㅋ

항체부터 블로킹, 트랜스퍼, 등등 거꾸로 요리조리 다 시도 해보았는데 마지막으로 내린 결론이 lysis문제라는 것입니다. 혹시..

교수님ㄲㅔ서는 이 lysis buffer(PRO-PREP)가 좋은 거라서 proteinase inhibitor을 안 넣어도 된다고 말씀하시고 구매한 사이트에서도 inhibitor을 사용하지 않아도 된다고 하는데 ㅋㅋ

혹시 이 lysis buffer 쓰시는 분 있나요.......? 알려주세요ㅠㅠ 혹시 proteinase inhibitor 문제가 아닌 다른 조언도 감사합니다. . ㅠㅠ

 

#cell lysis
 
#protein inhibitor
 
#westernblot
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  02.19 11:16  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

이 제품은 5종류의 PI가 포함된 제품이기 때문에 PI를 추가적으로 사용하지

않아도 됩니다.

WBT 단계에서 문제가 없고 lysis 단계에 문제가 있다면 HK gene을 한번

검출해 보세요.

아니면 RIPA나 다른 lysis buffer와 이제품으로 lysis한 시료를 전기영동해서

확연히 단백질 양에 차이가 나는지 coomassie 염색으로 확인해 보세요.

 

 

 

개구리당구왕빠킹  |  02.19 11:43  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

프로토콜의 문제인지 판단하려면 실험자의 실험방법이 기재되어 있어야 합니다. 

사용하시는 제품은 5종의 protease inhibitor가 들어있어서 그냥 사용해도 큰 문제는 없어보이지만 phospho form을 볼 경우에는 따로 phosphatase inhibitor를 넣어주는게 좋아보입니다.

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